传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus, IBDV)属于双RNA病毒科、禽双RNA病毒属,分为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型。血清Ⅰ型对鸡有致病性,血清Ⅱ型对鸡无致病性。IBDV基因组由双股RNA组成：A节段和B节段,编码5种蛋白。B节段有一个ORF,编码RNA依赖的RNA聚合酶(VP1)。A节段有两个ORF,大ORF编码病毒的VP2、VP3和VP4蛋白；小ORF编码VP5蛋白。IBDV发病机理不清是该病控制的难点。为此,本研究在转录组和体液免疫水平上对IBDV与宿主的相互作用进行了分析。首先,在转录组水平上,本研究分析了IBDV感染及IBDV编码基因转化对宿主Vero细胞基因转录的影响。以实验室已构建的5个Long-SAGE文库：正常Vero细胞文库、IBDV感染的Vero细胞文库、表达A节段编码蛋白的单克隆Vero细胞文库、表达VP243蛋白的单克隆Vero细胞文库、表达VP5蛋白的单克隆Vero细胞文库为基础,对文库中转录显著变化(P<0.05)的基因进行统计分析,发现217个可注释基因的转录发生显著变化。对差异转录基因进行聚类分析,发现蛋白质代谢、能量代谢、mRNA加工和细胞骨架相关基因转录变化最为显著。57个显著变化基因的荧光定量PCR验证结果显示,荧光定量PCR结果与文库数据的符合程度是60%-70%,确证了IBDV感染及IBDV编码基因Vero细胞SAGE文库大规模测序基因标签数据的正确性,这为IBDV的发病机制研究提供了大量的基因生物信息。以IBDV攻毒后的法氏囊组织和感染的鸡胚成纤维细胞RNA为模板,以IBDV感染Vero细胞的基因转录变化为线索,选取IBDV感染Vero细胞Long-SAGE文库中显著变化的15个基因和17个促炎性因子基因,设计鸡源引物,借助荧光定量PCR方法,分析了IBDV感染的法氏囊组织和鸡胚成纤维细‘胞的转录本变化。在IBDV感染的鸡胚成纤维细胞中,HMGN2的显著下调,推测与病毒感染细胞的细胞凋亡相关；促炎性因子表达普遍上调,其中β干扰素(IFN-p)转录本上调500倍以上,其他促炎性因子如IFN-G、BAFF、IL-6、IL-1B、IL-8和iNOS也上调20倍以上。在感染IBDV的法氏囊组织中,氯离子通道蛋白4(CLIC4)显著表达上调,推测与病毒的破膜释放相关；促炎性因子IL-6的转录上调1746倍。表达上调20倍以上的基因还有TNFSF8、IFN-B、IFN-G、IL-8和iNOS。这些数据说明,IBDV感染导致不同类型宿主细胞基因变化的种类具有一致性,但变化的趋势具有不完全一致性,充分显示了不同类型细胞的易感差异性。在IBDV感染的法氏囊组织中,我们发现Cofilin基因转录显著上调,为分析Cofilin基因表达与IBDV感染之间的关系,本试验利用抗Cofilin蛋白抗体对IBDV感染的鸡胚成纤维细胞和法氏囊组织进行分析,结果发现IBDV感染能够激活Cofilin基因的表达。基于IBDV感染宿主细胞的转录本信息,为了了解宿主对IBDV非结构蛋白VP4的信号反馈,以重组表达的VP4、VP3蛋白为抗原,制备了抗VP4、VP3单克隆抗体和多克隆抗体,建立了VP4抗体检测ELISA。分析了IBDV强毒株(NB株,BC6/85株)、中等偏强毒力株(MB43株)、中等毒力株(B87株)、低毒力毒株(NB弱毒株)感染21日龄SPF Leghorn鸡的VP4蛋白的体液免疫应答,ELISA抗体监测结果显示：IBDV强毒感染鸡VP4抗体于感染后23天阳转,40天阳性率达70%以上,VP3抗体于感染后20天阳转,23天阳性率达到100%；IBDV弱毒疫苗一次免疫鸡难以检出VP4抗体,VP3抗体于20天阳转,23天阳性率达到88.9%。中等毒力IBDV感染后,VP4抗体阳性率为10%到40%,中等偏强毒力IBDV感染后VP4抗体阳性率为30%到60%。以IBDV VP3、VP4基因Vero细胞表达蛋白的IFA检测出现了类似的结果。对感染后血清VP4抗体效价测定发现,强毒感染血清VP4抗体效价与中等偏强毒力、中等毒力、弱毒相比较,具有显著差异。抗VP3、VP4单克隆抗体的免疫组织化学检测进一步显示：VP3、VP4抗原可以在IBDV强毒感染鸡法氏囊中检测到,而在弱毒疫苗感染鸡中只能检测到VP3抗原,难以检测到VP4抗原。这些数据证明VP4抗原及抗体是鉴别IBDV野毒与疫苗毒感染的生物标记。