目的1.探究VPS4B在肝细胞肝癌中的表达情况及其与肝细胞肝癌患者生存预后之间的关系,初步分析VPS4B异常表达与HCC发生发展的关系。2.利用血清饥饿释放及小干扰试验研究VPS4B在Huh7和HepG2肝癌细胞株中表达的变化,初步探讨VPS4B在细胞增殖过程中的作用,旨在进一步揭示肝细胞肝癌形成的分子发病机制,以期为其治疗提供新的靶点。方法1.在组织学水平上,首先采用Western blot方法检测8对肝细胞肝癌患者肝癌组织及其对应的癌旁组织中VPS4B蛋白的表达情况。其次,运用免疫组化方法检测98例肝细胞肝癌组织石蜡切片中VPS4B和增殖指标Ki-67的表达情况,并统计分析VPS4B、Ki-67与肝细胞肝癌患者的年龄、性别、甲胎蛋白水平、肝炎、肝硬化、肿瘤分级、肿瘤体积大小及远处转移等临床病理因素的相关性。此外,通过对上述患者进行随访并根据随访结果用Kaplan-Meier法分析VPS4B与肝细胞肝癌患者的生存率的关系,以及单因素和Cox危险比例模型多因素分析VPS4B表达水平与患者预后的关系。2.在细胞学水平上,选取高表达VPS4B的肝细胞肝癌细胞系HuH7、HepG2作为研究对象,将这两种细胞系血清饥饿释放同步化处理后,用流式细胞仪检测两株细胞的细胞周期的变化,Western blot检测血清饥饿释放过程中VPS4B、cyclin A和PCNA的表达情况。干扰VPS4B表达后用流式细胞仪检测细胞周期及Western blot检测VPS4B、cyclin A、PCNA的表达变化。结果1.Western blot及免疫组化结果均显示,VPS4B在肝细胞肝癌组织中的表达显著高于对应的癌旁肝组织;统计学分析提示VPS4B的表达强度与肝细胞肝癌病理分级(P=0.026)以及血管浸润(P=0.033)显著相关;相关性分析研究表明VPS4B与Ki-67表达呈正相关(r2=0.398;P=0.003);Kaplan-Meier分析显示VPS4B在肝细胞肝癌中的高表达与患者总生存率的降低显著相关(P<0.01);单因素分析表明VPS4B与肝癌病人的不良预后有关(P=0.001);Cox危险比例模型分析显示VPS4B可做为肝癌患者的一种独立预后指标(P=0.016)。2.通过血清饥饿使HuH7及Hep G2细胞生长周期停滞,血清释放后刺激HuH7、HepG2细胞增殖。流式细胞仪分析显示血清饥饿时细胞大部分停滞于G0/G1期,一旦加入血清,细胞就从G1期重新进入S期。此外,Western blot也表明VPS4B﹑cyclinA、PCNA蛋白随着细胞周期的进展表达增加。小干扰内源性VPS4B的表达,可引起细胞增殖的抑制以及细胞周期的阻滞。结论1.VPS4B在肝细胞肝癌中高表达,并且可作为一种独立的与患者预后相关的指标,以上提示VPS4B可能与肝细胞肝癌的发生发展有关。2.在肝癌细胞增殖过程中,VPS4B表达上调;而干扰VPS4B的表达后,肝癌细胞的生长则受到抑制。推测VPS4B可能参与细胞周期进程和细胞增殖的调节。3.鉴于VPS4B在肝细胞肝癌中的高表达及其对细胞周期及增殖的调控作用,提示其可作为肝细胞肝癌治疗的重要分子靶点。