天麻素对大鼠离体脂肪组织释放游离脂肪酸的作用及其机制

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肥胖是当今社会危害健康、影响人类生命质量、快速增加社会医疗支出的现代流行性疾病,已被世界卫生组织确认为一种流行病,是大多数疾病的重要危险因素,可引起多种疾病和严重的并发症,严重地影响着人们的身体健康。肥胖症的发生是机体能量代谢失调的结果,其根本原因在于机体热能摄入大于消耗,剩余的热能转化为脂肪储存于体内。近几年来的研究表明,肥胖的发生与遗传基因、环境因素、膳食结构等因素有关,是以体内脂肪积聚过多为主要特征的一种全球广泛流行的独立性慢性疾病。因此,研究肥胖症及其相关机制和防治措施已成为21世纪的迫切任务。近年来有关抗氧化降血脂的研究越来越多,有资料表明肥胖诱导的代谢紊乱与细胞的氧化还原体系有着密切的联系。临床及实验研究证实,中药有较好的降脂及减肥作用,国内外学者已经对中药天麻进行了大量的研究,近年来有研究报道天麻素有抗自由基和保护细胞膜作用,但天麻素对大鼠离体脂肪组织释放游离脂酸及抗氧化作用影响的实验,尚未见报道。因此本实验观察了天麻素对大鼠离体脂肪组织释放游离脂肪酸及其抗氧化作用的影响,为研制出疗效好,副作用小的降脂减肥中药提供一定的理论依据。本实验采用对大鼠离体脂肪组织灌流的方法,通过在离体脂肪组织灌流液中分别加入不同浓度的天麻素(gastrodin,GSA)及阻断天麻素作用的药物,观察其对离体脂肪组织灌流液中的游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)以及白介素-6(IL-6)的影响,并初步分析其可能的作用机制。本实验选用健康SD大鼠,体重250±20g,分8组,依次为正常对照组(norm controlgroup,NC)、盐酸肾上腺素组(Adrenaline hydrochloride group,AD),天麻素低浓度组(gastrodin low-concentration group,GL),天麻素中浓度组(gastrodin medium-concentration group,GM),天麻素高浓度组(gastrodin high-concentration group,GH),天麻素中浓度+异搏定组(medium Gastrodin plus Verapamil group,GV),天麻素中浓度+心得安组(medium Gastrodin plus Propranolol group,GP),天麻素中浓度+SQ22,536组(Gastrodin plus Adenylyl cyclase inhibitor SQ22,536 group,GS)。取8个5ml烧杯,每个加入2ml用Krebs液配制的4%小牛血清白蛋白溶液,放入37℃温育箱中,持续通入95%O2和5%CO2的混合气体。分别加入生理盐水,盐酸肾上腺素(终浓度为1.0×10-6 mol/L),三种不同浓度的天麻素(终浓度为1.0×10-5,1.0×10-6,1.0×10-7mol/L),其余三个烧杯中分别加入天麻素(终浓度为1.0×10-6 mol/L)后再各自分别加入心得安、异搏定、腺苷酸环化酶抑制剂SQ22,536(三种药物终浓度为1.0×10-5 mol/L)。然后脱臼处死大鼠,迅速取出腹膜后脂肪,剪取脂肪组织块每份(50.0±2.0)mg,将每份脂肪组织块均匀切成8~10小块,再分别加入到上述烧杯中。37℃温育90分钟,用一次提取比色法测定每组灌流液游离脂肪酸(FFA)含量,TBA比色法测其丙二醛(MDA)及比色法测定总抗氧化能力(T-AOC)水平,酶联免疫法(ELISA)测定瘦素、TNF-a以及IL-6的水平。实验结果以均数±标准差((?)±s)表示,采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析,P<0.05被认为差异有显著性。实验结果如下:1.与正常对照组相比,低浓度组天麻素对FFA的释放量变化不明显(P>0.05),而中、高浓度组使FFA的释放明显增加,并存在剂量效应关系(r=0.896,P<0.01),但其增加程度低于盐酸肾上腺素组;与中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)比较,中浓度天麻素+异搏定组,中浓度天麻素+心得安组,中浓度天麻素+SQ22,536组的FFA释放显著降低(P<0.05)。2.与正常对照组相比,盐酸肾上腺素和中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)组T-AOC升高(P<0.01);与中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)比较,中浓度天麻素+异搏定组,中浓度天麻素+心得安组,中浓度天麻素+SQ22,536组T-AOC水平降低(P<0.05)。3.与正常对照组相比,盐酸肾上腺素和中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)使MDA生成减少(P<0.01);与中浓度天麻素(1.0×10-60 mol/L比较,中浓度天麻素+异搏定组,中浓度天麻素+心得安组,中浓度天麻素+SQ22,536组MDA生成增加(P<0.05)。4.与正常对照组相比,盐酸肾上腺素和中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)组瘦素、TNF-a、IL-6的水平无明显改变(P>0.05);与中浓度天麻素(1.0×10-6 mol/L)比较,中浓度天麻素+异搏定组,中浓度天麻素+心得安组,中浓度天麻素+SQ22,536组Leptin、TNF-a、IL-6的水平无明显改变(P>0.05)。本实验研究结果表明:天麻素(GAS)有拟肾上腺素作用,且具有剂量依赖性增加离体脂肪组织FFA的释放,其增加FFA释放的机制可能部分是通过β3。肾上腺素能受体、异搏定敏感的L型Ca2+通道及腺苷酸环化酶的途径介导;盐酸肾上腺素和天麻素明显增强离体脂肪组织抗氧化能力,使脂肪组织脂质过氧化程度减轻,对脂肪组织有一定的保护作用;但对离体脂肪组织中的Leptin、TNF-a、IL-6作用不明显。
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