目的：在建立局灶性脑缺血大鼠模型基础上，通过动物实验，验证中风康抗局灶性脑缺血，缩小脑梗死体积的疗效，并从抑制炎性损伤的角度探讨其作用机制。 方法 第一部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积和病理组织学的影响 1.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响 健康SD大鼠，体重250～300g，大鼠随机分为4组，即模型组、中风康高剂量组(简称高剂量组)、中风康低剂量组(简称低剂量组)、步长脑心通对照组(简称脑心通组)，每组每时间点取8只大鼠。高、低剂量组和脑心通组从术前5天至处死前每天灌胃给药，剂量分别为：中风康高剂量组18.8g/kg，中风康低剂量组9.4g/kg，步长脑心通组0.33g/kg。模型组予0.5％的羧甲基纤维素钠液灌胃，一日一次。 参照文献，采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血模型，大鼠腹腔内注射10％水合氯醛(350mg/Kg体重)麻醉后，仰卧固定，颈部正中切口，分离并暴露右侧颈总及颈内、外动脉，并在颈内外动脉分叉处结扎颈外动脉，右侧颈总动脉剪口，插入头端烧成圆钝形直径为0.25mm的尼龙鱼线，进线长度约18～19mm，在大脑中动脉起始端堵塞大脑中动脉，然后将颈总动脉连同尼龙鱼线一起结扎，缝合皮肤，放回笼内，单笼喂养。假手术组只分离、暴露血管，不结扎颈总动脉及颈外动脉，不插入尼龙鱼线。选择苏醒后左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者进行实验，否则视为栓堵失败，弃之不用。手术过程中监测大鼠直肠温度，并用电热毯保持在36.5～37.5℃。 于造模成功后6h、12h、24h、48h检测各组大鼠脑梗死体积的变化。动物麻醉，断头取脑。脑组织冷冻后间隔1mm连续冠状位切片，加入2％的TTC染色，37℃恒温孵育30min，正常脑组织染为深红色，脑梗死区不染色，呈灰白色，再置于2％多聚甲醛磷酸缓冲液固定24h。剥离脑片的梗死区部分，按文献用排水法测脑梗死体积。 2.中风康对局灶性脑缺血脑病理组织学的影响 健康SD大鼠，体重250～300g，大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、中风康高剂量组(简称高剂量组)、中风康低剂量组(简称低剂量组)、步长脑心通对照组(简称脑心通组)，每组取5只大鼠。给药剂量同上，假手术组、予0.5％的羧甲基纤维素钠液灌胃，一日一次。 造模方法同上，造模成功后48h，处死各组大鼠，取右侧大脑额顶叶脑皮质组织，10％的甲醛固定，乙醇逐级脱水，石蜡包埋，切片机切片，HE染色，光镜观察并摄像。 数据采用均数±标准差((x)±s)表示，用SPSSforWindows10.0统计软件处理，多组比较先采用单因素方差分析，然后用Student-Newman-KeulsTest进行每两组间比较；两组比较采用t检验。 第二部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织TNF-α、IL-8含量的影响 动物分组、造模方法、用药情况同前，造模成功后分别于6h、12h、24h、48h麻醉各组大鼠，断头取右侧大脑，去除小脑和延髓部分，称重后移入玻璃匀浆管中，加入9倍体积的预冷生理盐水，冰盘上充分研碎，使组织匀浆化。制备好的10％匀浆3500r/min离心10min，提取上清待测，检测各组大鼠TNF-α、IL-8含量的变化。 用放射免疫法检测TNF-α、IL-8含量，并用脑组织蛋白含量校正。 第三部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织ICAM-1、MMP-9的影响 动物分组、造模方法、用药情况同前，造模成功后分别于6h、12h、24h、48h麻醉各组大鼠，断头取右侧大脑，去除小脑和延髓部分，称重后移入玻璃匀浆管中，加入等倍体积的预冷生理盐水，冰盘上充分研碎，使组织匀浆化。制备好的50％匀浆3500r/min离心10min，提取上清待测。 采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定ICAM-1、MMP-9含量。用蛋白含量校正ICAM-1浓度；在492nm测MMP-9的OD值，MMP-9浓度与OD值成正比，用酶标仪测得OD值间接反映其量的变化。 结果 第一部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积和病理组织学的影响 1.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积的影响 局灶性脑缺血6h，梗死灶迅速扩大(P＜0.01)，随缺血时间延长，局灶性脑缺血大鼠梗死灶体积缓慢进展，至48小时，梗死灶略有缩小(P＜0.01)；与模型组比较，各治疗组梗死灶体积均有不同程度缩小，以高剂量组降低最为显著(P＜0.05或P＜0.01)。 2.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑病理组织学的影响 假手术组：神经细胞、胶质细胞及毛细血管形态正常，结构完整，核仁清晰，胞浆无红染。 模型组：局灶性脑缺血48小时，脑皮质呈筛状坏死灶，可见大量死亡神经元，坏死灶中以胶质细胞为主，间质水肿明显，缺血周围区锥体细胞明显减少，细胞体积缩小，核不规则；星形细胞肿胀、数量较正常组增多；血管周围间隙较正常组明显扩大，血管结构无明显变化，但可见血管周围炎性细胞浸润。 治疗组：与模型组比较，各治疗组坏死的神经细胞较少，锥体细胞结构紊乱程度明显较轻，水肿较轻，炎细胞浸润较少，尤以高剂量组减轻最明显。 第二部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织TNF-α、IL-8含量的影响 1.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织TNF-α含量的影响 与假手术组比较，局灶性脑缺血6h，模型组脑组织TNF-α含量开始升高，12h达到高峰(P＜0.01)，与同时点模型组比较，各治疗组脑组织TNF-α含量均有不同程度的下降，尤其在缺血24h内下降最为显著(P＜0.05或P＜0.01)。 2.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织IL-8的影响 与假手术组比较，局灶性脑缺血6h，模型组脑组织IL-8含量降低(P＜0.01)，12h开始增加，至24小时达到高峰(P＜0.01)，与同时点模型组比较，局灶性脑缺血6h，各治疗组脑组织IL-8含量增加(P＜0.05)，缺血24-48h，中风康高、低剂量组均能降低脑组织IL-8含量(P＜0.05)。 第三部分：中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织ICAM-1、MMP-9的影响 1.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织ICAM-1的影响 与假手术组比较，局灶性脑缺血6h，模型组脑组织ICAM-1含量开始增加(P＜0.05)，至24h达到高峰(P＜0.01)；与同时点模型组比较，各治疗组脑组织ICAM-1含量有不同程度降低，以高剂量组降低最为显著(P＜0.01)，且缺血12h和24h高剂量组明显低于脑心通组(P＜0.05)。 2.中风康对局灶性脑缺血大鼠脑组织MMP-9的影响与假手术组比较，局灶性脑缺血6h，模型组脑组织MMP-9开始增加，至24h达到高峰(P＜0.01)；与同时点模型组比较，各治疗组脑组织MMP-9均有不同程度降低(P＜0.05或P＜0.01)。 结论 1.中风康可改善缺血时脑组织病理形态学表现，明显缩小局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积，保护缺血脑组织。 2.中风康可降低局灶性脑缺血模型大鼠脑组织的TNF-α含量，调节IL-8含量，通过调节前炎性介质释放，减轻脑缺血的炎性损伤。 3.中风康可降低局灶性脑缺血模型大鼠脑组织的ICAM-1、MMP-9含量，通过减轻脑缺血损伤时的免疫黏附作用和对毛细血管的炎性破坏，维护血脑屏障的完整性，改善脑水肿，减轻神经细胞的坏死。