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目的:
本研究旨在通过成功建立对比剂肾病(Contrast induced nephropathy, CIN)大鼠模型,观察大鼠肾脏病理改变及血清肌酐(Scr)、白细胞介素6(IL-6)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及细胞凋亡指标(Bcl-2、Bax)表达水平的变化,探讨CIN的发病机制。
研究方法:
1、建立CIN大鼠模型:将30只雄性Wistar大鼠随机分成2组:实验组和对照组,每组各15只。适应性喂养7d。实验第1天2组大鼠分别予戊巴比妥腹腔注射麻醉后,剥离股静脉。分别取血2ml后,实验组给予泛影葡胺10mg/kg股静脉注射,对照组给予生理盐水10mg/kg股静脉注射。术后第48h、72h分别由内眦静脉取血2ml,72h取血后处死大鼠,取双肾,分离皮质、髓质。实验组注射对比剂后48-72h Scr较原有基础水平升高25%以上提示CIN模型建立成功。
2、标本处理:3次留取的血标本均予离心后测定血清Scr、IL-6、hs-CRP、TNF-α含量变化。左肾皮质保存于-80℃冰箱,以测定肾组织中MDA、SOD、NO、ET-1、VEGF及Bcl-2、Bax的表达水平。右肾皮质大部分石蜡包埋行HE染色及免疫组化染色;小部分制成1 mm3浸泡于戊二醛磷酸缓冲液中用于电镜标本。
结果:
1、血清学指标:(1)2组大鼠术前血清中Scr、IL-6、hs-CRP、TNF-α含量无明显差异(P>0.05);(2)术后48h血清中Scr、IL-6、hs-CRP含量实验组高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);(3)术后72h血清中Scr、hs-CRP含量实验组仍高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。
2、肾组织指标:术后72h肾组织中(1) MDA、ET-1、Bax含量实验组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2) Bcl-2含量实验组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3) VEGF在实验组高表达者为80%,对照组为26.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。
3、组织学变化:(1)光镜显示:实验组:①肾小管上皮细胞空泡样变、胞质变性,小管结构甚至消失,且可见细胞核固缩、裂解;②肾小管、肾间质可见炎症细胞浸润;③肾小管管腔内可见蛋白等管型,管腔甚至闭塞;④肾小动脉扩张、淤血;⑤肾小球结构未见明显异常。对照组肾小管及肾小球基本正常。(2)电镜显示:实验组:①肾小管基底膜重度增厚,内质网肿胀,内皮细胞内线粒体严重肿胀,嵴排列紊乱,甚至消失;②管腔面的微绒毛大量脱落。对照组肾小管及肾小球超微结构基本正常。
结论:
1、本研究通过注射泛影葡胺成功建立CIN大鼠模型,结果稳定、可重复性高。
2、CIN的发病机制可能与氧化应激、炎症反应、肾脏血管舒缩不稳定、凋亡以及直接肾毒性损伤相关,且是上述作用共同参与的结果。