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苏木(Caesalpinia sappan L.),是一种豆科小乔木植物。中药苏木(Sappan Lignum)来源于植物苏木(Caesalpinia sappan L.)的干燥心材。在传统中医领域,苏木常应用于痛经的治疗,并由于具有止血抗炎等方面功效而被广泛应用[1]。在长期的苏木药理活性研究中,发现其大量显著的药理活性。苏木成分复杂,以物质结构基本骨架特点为分类依据,可将苏木中的化合物大致分为五种类型,分别是苏木素类、原苏木素类、高异黄酮类、苏木查尔酮类和苯丙素类[2]等。本研究应用超高效液相色谱-线性离子阱-轨道离子阱质谱联用技术(u-HPLC-LTQ-Orbitrap-MSn),建立了一种简单精确高效的方法,用于分离和鉴定苏木水提液中复杂且多的化学成分。采用Thermo Hypersil Gold C18 column(2.1 mm×100mm,1.9μm)色谱柱,质量分数为0.2%甲酸水溶液和甲醇两种流动相进行梯度洗脱,通过在线性离子阱中的碎裂作用,获得多级质谱碎片,并由轨道离子阱检测碎片信息,最终输出高分辨数据,结合苏木中主要化学成分的裂解规律、特征性离子碎片并参考文献资料,对苏木水提液中的主峰进行指认和鉴定。结果可得,在苏木水提液中有31种不同化学成分,其中17种物质被初步推测鉴定出来,14种物质文献未报道。该分析过程在36 min内完成。由此可见,u-HPLC-LTQ-Orbitrap-MSn技术具有简单高效的特点,可为分析其他中药材中复杂化学成分鉴定提供参考。其次,本研究建立了一种超高效液相(UPLC)法,同时测定苏木中两种重要成分,巴西苏木素及原苏木素B的含量。采用UPLC-PDA方法,色谱柱为ACQUICTY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以甲醇-冰醋酸水溶液(质量分数0.2%)的二相溶液体系为流动相,7.5 min时间完成梯度洗脱的过程,柱温40℃,流量为0.3 mL/min,检测波长为280 nm。进样量为10μL。结果可见,色谱图中,两个目标成分的色谱峰均达到基线分离,在0.195~200μg/mL范围内,两种被测物质的质量浓度与峰面积均有良好的线性关系,R2均为0.999 8;平均回收率分别为103.89%、99.83%,RSD为1.26%、1.87%。由此可知,相比HPLC,UPLC的应用明显提高了药物分析的速度,缩短了含量测定的时间,在同时测定两种及以上成分的应用上具有一定优势,具备更高的灵敏度,可为今后苏木质量检测方法建立了新标准提供参考。另外,本研究应用超高效液相串联质谱法(Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrum/Mass Spectrum),研究原苏木素B(Protosappanin B)及巴西苏木素(Brazilin)大鼠体内的绝对生物利用度及其药代动力学特征参数。其中,原苏木素B质谱负离子检测通道为303.26>231.13,色谱柱采用ACQUICTY UPLC BEH Symmetry Shield RP-18(2.1×100 mm,1.7μm),考察大鼠经尾静脉注射(3 mg·kg-1)或灌胃(15 mg·kg-1)给予原苏木素B后大鼠血样中药物浓度变化的情况;巴西苏木素质谱负离子检测通道为285.23>163.21,色谱柱采用ACQUICTY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm),考察大鼠经静脉注射(3 mg·kg-1)或灌胃(30 mg·kg-1)给予巴西苏木素后的大鼠血样中药物浓度变化的情况。流动相均为乙腈-醋酸铵(5 mM)水溶液,设置梯度洗脱全过程为5 min;柱温25℃,体积流量为0.3 m L·min-1,进样量为10μL。利用WinNonLin3.3软件计算药动学参数,并根据药时曲线下面积AUC0-∞和给药剂量,计算其绝对生物利用度。原苏木素B在0.49-2000 ng·m L-1范围内线性良好(R2=0.998);巴西苏木素在3.90-1000ng·m L-1范围内线性良好(R2=0.998);结果可见,两种药物的方法学考察均符合要求,具体包括了日内精密度、日间精密度及提取回收率考察。两种药物进行了大鼠体内实验,本文采用非隔室模型对其药代动力学参数进行模拟,结果为两种药物的绝对生物利用度均偏低,其中,原苏木素B仅为12.20%,巴西苏木素仅为19.40%。建立的UPLC-MS/MS方法专一快捷灵敏,适用于检测大鼠血浆的原苏木素B或巴西苏木素。