生殖器疱疹主要是由单纯疱疹病毒2型(HSV-2)引起的。近年来，生殖器疱疹的发病率迅速上升，危害性亦日益突出。虽然有效的抗病毒药物在缩短病程、减轻病情等方面确有较好的疗效，但目前尚无特效药物可最终清除潜伏于神经节内的病毒，不能控制其发生和复发，因此研制疱疹病毒疫苗已成为预防生殖器疱疹感染的关键。 在目前研究的疱疹病毒疫苗中，亚单位疫苗因其安全有效而受到人们的青睐。大量的研究表明，HSV-2的糖蛋白疫苗可用于控制生殖器疱疹的感染和复发，其中糖蛋白D是中和抗体、抗体依赖性细胞毒反应(ADCC)和CD4+、CD8+T淋巴细胞介导的病毒特异性细胞毒反应的靶抗原；而且糖蛋白D的基因序列高度保守，在HSV-1和HSV-2之间存在着高度的同源性，有抗原的交叉反应，因此被列为研究HSV疫苗的理想候选抗原。 大量研究证明，免疫佐剂能辅助疫苗产生迅速、持久和高水平的免疫应答。近几年来，国内外学者一直在探索应用细胞因子佐剂来加强亚单位疫苗的免疫效果，并取得了一定的成效，而IL-2作为细胞因子中的重要一员备受关注。IL-2是由活化的T淋巴细胞分泌的一种细胞因子，可促进T淋巴细胞活化增殖和B淋巴细胞分泌，激活NK细胞和细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性，促进CD4+T淋巴细胞合成分泌γ-IFN等，被认为是T细胞生长因子。目前尚无关于HSV-2糖蛋白D和IL-2融合蛋白疫苗的报道，本实验在前阶段研究的基础上，在小鼠生殖器疱疹模型中鉴定了我们前阶段制备的亚单位疫苗对小鼠的保护作用。 以往的许多研究都是针对gD基因的部分片段进行的，这会造成一些抗原决定簇的丢失，因此本研究采用了gD2的全基因片段。我们首先采用基因克隆的方法将gD2基因片段与rIL-2cDNA片段进行融合克隆入大肠杆菌，经酶切鉴定后高效表达，蛋白产物经Westernblot鉴定分析后，经纯化所得到融合蛋白的亚单位疫苗。再进一步将此亚单位疫苗进行小鼠生殖器疱疹模型的动物实验，通过小鼠病变严重程度评分，阴道分泌物病毒滴度分析，测定血清中HSV-2-IgG与中和抗体滴度，观察小鼠阴道组织病理变化及应用免疫组化技术观察阴道组织中的T细胞亚群，研究疫苗组与对照组相比，在体液免疫和细胞免疫方面的不同。以期最终研制出能有效预防HSV感染和治疗复发性生殖器疱疹的HSV疫苗。 结果：1.Westernblot试验证明我们制备的疫苗可以和gD2单克隆抗体结合，表明了该疫苗为实验所要获取的目的蛋白。 2.通过TCID50检测结果显示HSV-2-Sav株病毒毒力良好，可以用于动物接种。 3.PBS组和IL-2组小鼠给予病毒攻击后6天开始出现临床症状，8天后开始死亡，11天内全部死亡。接种gD2-IL-2融合蛋白疫苗组小鼠9天开始出现临床症状，11天开始死亡，死亡9只，病变严重程度评分及死亡率与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。 4.病毒攻击后小鼠阴道分泌物行病毒培养结果显示：PBS组和IL-2组之间前3天均无显著性差异(P＞0.05)；疫苗组与PBS组和IL-2组之间第1天无显著性差异(P＞0.05)，第2天和第3天存在显著性差异。 5.病毒攻击后组织病理学检查见PBS组和IL-2组小鼠阴道病变炎症明显；疫苗组小鼠病变程度明显减轻，且仅少数出现。 6.在电镜下发现PBS组和IL-2组小鼠阴道上皮细胞内可见病毒样颗粒；小鼠阴道上皮细胞超微结构有所改变。 7.免疫前(即0周)3组HSV-2-IgG与中和抗体滴度均为阴性结果，无显著性差异(P＞0.05)。免疫后病毒攻击前(即9周)PBS组和IL-2组抗体滴度仍为阴性结果无显著性差异(P＞0.05)，疫苗组与其它两组比较显示抗体滴度有显著性差异(P＜0.01)。 8.免疫组化结果示：PBS组和IL-2组小鼠阴道中CD4+、CD8+T淋巴细胞数量较少，散在分布；疫苗组小鼠阴道组织中CD4+、CD8+T数量较多，以CD4+细胞增多更为明显，CD4+/CD8+比例升高。 结论：1.我们成功建立了小鼠生殖器疱疹动物模型，为今后的进一步研究奠定了基础。 2.本研究中用gD2单克隆抗体验证了我们所制备的融合蛋白，表明了该疫苗为实验所要获取的目的蛋白。 3.自制的亚单位疫苗能够在一定程度上激发免疫小鼠产生HSV-2-IgG和中和抗体，促进CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖。 4.初步证实了构建的HSV-gD2-IL-2融合蛋白疫苗与对照组相比在抵抗致死性病毒攻击时对小鼠有较好的保护作用。