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聚合物涂敷硅胶是一种新型复合型液相色谱填料,它因拓宽了硅胶的应用范围而引起人们的广泛关注。本文综述了液相色谱填料的发展、涂敷硅胶的制备方法和研究进展;探索了一种新的聚合物(甲基丙烯酸环氧丙酯)涂敷硅胶的合成方法,以此聚合物涂敷硅胶为基质采用新的化学改性方法制备了一系列新型液相色谱固定相,并应用于生物大分子的分离纯化。本论文分以下几部分:
首先,利用溶液聚合法和分散聚合法,以甲基丙烯酸环氧丙酯为单体,以甲基丙烯酸乙二醇双酯为交联剂,制备了甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)涂敷硅胶。详细研究了聚合方法、单体浓度、反应温度、反应介质、引发剂含量等对涂敷硅胶的影响,得出制备聚合物涂敷硅胶的最佳方法和条件。
其次,以自制的甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)涂敷硅胶为基质,采用新的化学改性方法制备了新型弱阳、强阳和弱阴离子交换色谱固定相,并用于生物大分子的分离。详细考察了它们的离子交换特征、盐种类、pH值,流速等因素对蛋白质在色谱柱上保留行为的影响;结果表明,两种阳离子交换色谱填料分离性能优良,化学稳定性好,可在pH=11的流动相中长期使用,适用于快速分离,并将其应用于鸡蛋清中溶菌酶和胰蛋白酶粗品中胰蛋白酶的纯化,回收率均达90%以上。但是阴离子交换色谱填料只能分离三种酸性蛋白,且重现性差,分析失败原因提出改进方法。
最后,以自制的甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)涂敷砖胶为基质,制备了新型正相和疏水色谱填料。分别考察其正相色谱性能和疏水色谱性能,结果表明止相色谱填料完全可以用于碱性化合物的分离,这是键合砖胶柱无法实现的;疏水色谱填料可以在11分钟内分离六种蛋白(包括疏水性很强的胰岛素),比文献报道的分离时间短,有利于蛋白质的快速分离和纯化,并将其应用于鸡蛋清中卵清蛋白(OVA)的纯化,纯化后OVA的纯度高达92%。