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背景
目前多项研究显示ADAM17在包括胃癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤中呈现高表达,且其表达与肿瘤发生发展、病理、化疗药物反应等具有相关性,但ADAM17与结直肠癌的相关性研究较少,其表达与淋巴内皮细胞成管的相关性及机制尚不清楚。
目的
明确ADAM17mRNA、ADAM17蛋白在结直肠癌组织及正常组织中的表达情况,分析ADAM17mRNA、ADAM17蛋白的表达与肿瘤病理的相关性,探索ADAM17的表达对于结直肠癌细胞增殖的影响以及对于体外淋巴内皮细胞成管的影响。
方法
(1)采用RealtimePCR法检测ADAM17mRNA在结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况;分析肿瘤组织中ADAM17mRNA的表达与T分期、N分期、pTNM分期的相关性;
(2)采用免疫组化法检测ADAM17蛋白在结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况;分析肿瘤组织中ADAM17蛋白的表达与肿瘤各项病理指标的相关性;
(3)采用Westernblot法检测正常细胞株及6株结直肠癌细胞株中ADAM17蛋白的表达情况,筛选ADAM17蛋白表达最高的细胞系;
(4)采用RealtimePCR法检测siRNA-391、siRNA-1356、siRNA-483干扰效果最好的siRNA;
(5)将筛选的结直肠癌细胞系分为对照组、质粒过表达组、阴性对照组、干扰组,绘制各组细胞生长曲线;采用MTT法检测各组细胞的吸收度(A)值;
(6)将筛选的结直肠癌细胞系与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,分为共培养对照组、共培养+过表达质粒组、共培养+干扰组以及共培养+阴性对照组四组,观察淋巴内皮细胞成管。
结果
(1)36例结直肠癌患者癌组织中的ADAM17mRNA表达水平明显高于配对的正常组织(p<0.001);100例结直肠癌患者癌组织中的ADAM17蛋白表达水平明显高于配对的正常组织(p<0.001);
(2)36例患者中,T3+T4组患者的结直肠癌组织中ADAM17mRNA的表达水平明显高于T1+T2组患者(p=0.002),有淋巴结转移组患者的结直肠癌组织中ADAM17mRNA的表达水平明显高于无淋巴结转移组患者(p<0.001);
(3)100例结直肠癌组织中,ADAM17蛋白的表达情况与肿瘤的分化程度、T分期、N分期、pTNM分期、神经侵犯、脉管瘤栓、静脉侵犯呈相关性;
(4)在不同的结直肠癌细胞株及正常肠黏膜FHC细胞株中,Caco2细胞株中ADAM17的表达量最高;
(5)RealtimePCR显示,在siRNA-391、siRNA-1356、siRNA-483中,siRNA-391的干扰效果最好;
(6)ADAM17过表达的Caco2细胞生长速度明显加快,特别是进入对数生长期后尤为明显;
(7)MTT法检测各组细胞的吸光度(A)值中,过表达质粒组细胞吸光值升高的速度较快,96h时吸光度(A)值最高;
(8)Caco2细胞株与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,观察共培养对照组、共培养+过表达质粒组、共培养+干扰组以及共培养+阴性对照组淋巴内皮细胞成管情况,共培养+过表达质粒组淋巴内皮细胞成管率明显高于对照组及阴性对照组,干扰组未见淋巴管形成。
结论
(1)结直肠癌患者癌组织中的ADAM17mRNA及ADAM17蛋白表达水平明显高于配对的正常组织;
(2)结直肠癌组织中的ADAM17mRNA表达水平与肿瘤的T分期、N分期呈相关性;
(3)结直肠癌组织中ADAM17蛋白的表达与肿瘤分化程度、T分期、N分期、pTNM分期、神经侵犯、脉管瘤栓、静脉侵犯呈相关性;
(4)ADAM17过表达促进Caco2细胞的增殖;
(5)将Caco2人结肠癌与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,ADAM17过表达有利于淋巴内皮细胞成管,反之,干扰ADAM17的表达则抑制了淋巴内皮细胞的成管。
目前多项研究显示ADAM17在包括胃癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤中呈现高表达,且其表达与肿瘤发生发展、病理、化疗药物反应等具有相关性,但ADAM17与结直肠癌的相关性研究较少,其表达与淋巴内皮细胞成管的相关性及机制尚不清楚。
目的
明确ADAM17mRNA、ADAM17蛋白在结直肠癌组织及正常组织中的表达情况,分析ADAM17mRNA、ADAM17蛋白的表达与肿瘤病理的相关性,探索ADAM17的表达对于结直肠癌细胞增殖的影响以及对于体外淋巴内皮细胞成管的影响。
方法
(1)采用RealtimePCR法检测ADAM17mRNA在结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况;分析肿瘤组织中ADAM17mRNA的表达与T分期、N分期、pTNM分期的相关性;
(2)采用免疫组化法检测ADAM17蛋白在结直肠癌组织及配对正常组织中的表达情况;分析肿瘤组织中ADAM17蛋白的表达与肿瘤各项病理指标的相关性;
(3)采用Westernblot法检测正常细胞株及6株结直肠癌细胞株中ADAM17蛋白的表达情况,筛选ADAM17蛋白表达最高的细胞系;
(4)采用RealtimePCR法检测siRNA-391、siRNA-1356、siRNA-483干扰效果最好的siRNA;
(5)将筛选的结直肠癌细胞系分为对照组、质粒过表达组、阴性对照组、干扰组,绘制各组细胞生长曲线;采用MTT法检测各组细胞的吸收度(A)值;
(6)将筛选的结直肠癌细胞系与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,分为共培养对照组、共培养+过表达质粒组、共培养+干扰组以及共培养+阴性对照组四组,观察淋巴内皮细胞成管。
结果
(1)36例结直肠癌患者癌组织中的ADAM17mRNA表达水平明显高于配对的正常组织(p<0.001);100例结直肠癌患者癌组织中的ADAM17蛋白表达水平明显高于配对的正常组织(p<0.001);
(2)36例患者中,T3+T4组患者的结直肠癌组织中ADAM17mRNA的表达水平明显高于T1+T2组患者(p=0.002),有淋巴结转移组患者的结直肠癌组织中ADAM17mRNA的表达水平明显高于无淋巴结转移组患者(p<0.001);
(3)100例结直肠癌组织中,ADAM17蛋白的表达情况与肿瘤的分化程度、T分期、N分期、pTNM分期、神经侵犯、脉管瘤栓、静脉侵犯呈相关性;
(4)在不同的结直肠癌细胞株及正常肠黏膜FHC细胞株中,Caco2细胞株中ADAM17的表达量最高;
(5)RealtimePCR显示,在siRNA-391、siRNA-1356、siRNA-483中,siRNA-391的干扰效果最好;
(6)ADAM17过表达的Caco2细胞生长速度明显加快,特别是进入对数生长期后尤为明显;
(7)MTT法检测各组细胞的吸光度(A)值中,过表达质粒组细胞吸光值升高的速度较快,96h时吸光度(A)值最高;
(8)Caco2细胞株与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,观察共培养对照组、共培养+过表达质粒组、共培养+干扰组以及共培养+阴性对照组淋巴内皮细胞成管情况,共培养+过表达质粒组淋巴内皮细胞成管率明显高于对照组及阴性对照组,干扰组未见淋巴管形成。
结论
(1)结直肠癌患者癌组织中的ADAM17mRNA及ADAM17蛋白表达水平明显高于配对的正常组织;
(2)结直肠癌组织中的ADAM17mRNA表达水平与肿瘤的T分期、N分期呈相关性;
(3)结直肠癌组织中ADAM17蛋白的表达与肿瘤分化程度、T分期、N分期、pTNM分期、神经侵犯、脉管瘤栓、静脉侵犯呈相关性;
(4)ADAM17过表达促进Caco2细胞的增殖;
(5)将Caco2人结肠癌与HLEC人淋巴内皮细胞共培养,ADAM17过表达有利于淋巴内皮细胞成管,反之,干扰ADAM17的表达则抑制了淋巴内皮细胞的成管。