【摘 要】
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肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,KP）是一种革兰氏阴性菌,可以引起坏死性肺炎、肝脓肿,以及呼吸道、泌尿道、伤口和血液感染。肺炎克雷伯菌为条件致病菌,它是肠道及泌尿系统中正常菌群,机体免疫力低下、菌群失调时会引起各种炎症。目前,随着抗生素的广泛使用,多重耐药KP的分离率逐年上升。噬菌体是一种病毒,它侵染并杀灭细菌。噬菌体作为一种抗菌物质,可以特异性识别宿主菌并对其进行裂解。
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肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,KP）是一种革兰氏阴性菌,可以引起坏死性肺炎、肝脓肿,以及呼吸道、泌尿道、伤口和血液感染。肺炎克雷伯菌为条件致病菌,它是肠道及泌尿系统中正常菌群,机体免疫力低下、菌群失调时会引起各种炎症。目前,随着抗生素的广泛使用,多重耐药KP的分离率逐年上升。噬菌体是一种病毒,它侵染并杀灭细菌。噬菌体作为一种抗菌物质,可以特异性识别宿主菌并对其进行裂解。本研究包括肺炎克雷伯菌的分离纯化、噬菌体的分离鉴定及噬菌体全基因组分析。结果分离纯化出6株肺炎克雷伯菌。经检测,这6株KP均具有形成生物被膜的能力,基因组中均携带如I型菌毛相关基因fim、wab G基因等毒力基因和耐药基因,且这6株分离菌均对多种抗生素具有耐药性,均为多重耐药肺炎克雷伯菌。以这6株KP作为宿主菌,经污水富集法从未经处理的医院废水中分离筛选出2株裂解性噬菌体,分别命名为ABTNL-1、ABTNL-2。经宿主谱测定结果显示,噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2能裂解两株及以上细菌;透射电镜观察显示,这两株噬菌体形态学均属于有尾噬菌体目、长尾噬菌体科;通过测定最佳感染复数,噬菌体ABTNL-1和ABTNL-2的最佳感染复数分别为0.1和1;通过测定一步生长曲线测定噬菌体的裂解能力,ABTNL-1和ABTNL-2的潜伏期分别为30 min和40 min,裂解量分别为200 PFU/cell和150 PFU/Cell;2株噬菌体对氯仿均不敏感;在0℃至40℃时,两株噬菌体处于相对稳定的状态,可以维持较高的效价,达到50℃后,噬菌体ABTNL-1失去活性,噬菌体ABTNL-2活性降低,当温度达到60℃时,两株噬菌体均失去活性;在中性pH时稳定,在过酸或过碱的条件下失去活性;单一噬菌体在不同感染复数下均能抑制宿主菌增长,但在5 h后细菌数量上升,推测可能产生噬菌体抗性菌株;采用噬菌体鸡尾酒在抑制宿主菌细胞生长方面更有效,且噬菌体抗性菌株出现的时间为10 h。噬菌体全基因组通过蛋白酶K/SDS方法获得,进行高通量二代测序,获得基因组序列,并对其基因进行分析。噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2均为双链线性DNA:噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2基因组全长分别为112841和49159 bp,GC含量分别为45.54%和51.03%,t RNA数目分别为25和0。基因组功能注释结果显示:噬菌体ABTNL-1、ABTNL-2分别含有144和77个ORFs,具有已知功能的ORFs数目分别是55和36个。经过比对,这2株噬菌体基因组中均不含溶原基因、抗生素耐药基因和毒力基因,证明这2株噬菌体在基因水平上的安全性。通过末端酶大亚基和主要衣壳蛋白基因建立进化树。结果显示,噬菌体ABTNL-1与Demerecviridae亚科,Sugarlandvirus属的噬菌体之间的亲缘关系相对较近;噬菌体ABTNL-2与Drexlerviridae亚科,Webervirus属的噬菌体之间的亲缘关系相对较近。本研究筛选裂解性噬菌体,旨在杀灭多重耐药肺炎克雷伯菌,并研究其特征,并对基因组进行分析,为将噬菌体应用于肺炎克雷伯菌感染奠定基础。
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