枣、酸枣离体培养研究

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枣和酸枣是鼠李科枣属植物,是原产我国的重要果树资源。本研究以赞皇大枣和苹果枣花药为材料,对影响花药培养的预处理、蔗糖浓度以及植物生长调节剂进行了研究,获得了花药再生植株。以赞皇大枣和苹果枣组培苗为材料,研究植物生长调节剂对组培苗增殖培养的影响,筛选出了适宜组合,促进组培苗的增殖并提高成苗质量。以酸枣组培苗叶片为材料,通过研究酸枣离体叶片再生不定芽的诱导、再生不定芽的伸长生长、再生植株的增殖培养和再生植株的生根培养,建立了酸枣叶片高效再生植株体系。通过花药培养、增殖培养及叶片高效再生植株体系,利于种质创新和新品种选育,这为种质资源离体保存、诱变育种、培养单芽无性系、转基因受体系统、离体快繁无性系砧木等研究奠定基础,具有理论价值和实际意义。主要研究结果如下:1获得赞皇大枣和苹果枣花药再生植株(1)不同时间的低温处理对赞皇大枣和苹果枣花药有明显的影响,处理之间存在显著差异。赞皇大枣花药低温处理3 d,愈伤组织诱导率最大,为79.27%,有利于愈伤组织的分化和植株再生。苹果枣花药低温处理5 d,愈伤组织诱导率最大,为87.71%,有利于愈伤组织的分化和植株再生。(2)赞皇大枣花药在蔗糖浓度为6%和3%时,有利于愈伤组织的诱导,但6%蔗糖浓度的愈伤组织褐化率较高,3%蔗糖浓度适合诱导愈伤组织。苹果枣花药在蔗糖浓度为3%时,有利于愈伤组织的诱导。(3)适合花药愈伤组织诱导的基本培养基为MS+TDZ+NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,TDZ 0.5 mg/L和NAA 1.5 mg/L适合赞皇大枣和苹果枣花药愈伤组织的诱导,赞皇大枣愈伤组织诱导率达到87.71%,苹果枣愈伤组织诱导率达到92.01%。(4)适合花药愈伤组织分化的基本培养基为MS+6-BA+IBA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,6-BA 1.5 mg/L和IBA 0.1 mg/L适合赞皇大枣和苹果枣花药愈伤组织的分化,愈伤组织的分化率分别达到76.60%和83.48%,再生系数分别为6.05和12.36,并获得赞皇大枣再生苗21株,苹果枣45株。2赞皇大枣和苹果枣增殖培养(1)适合赞皇大枣组培苗增殖培养的培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L,平均伸长为2.57 cm,增殖系数为5.14。(2)适合苹果枣组培苗增殖培养的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,平均伸长为3.82 cm,增殖系数为4.77。3获得酸枣叶片高效再生植株(1)通过研究暗培养对酸枣叶片再生的影响,发现叶片接入再生培养基后,经过3周暗培养可提高叶片再生率,叶片平均出芽数显著增加。(2)不同植物生长调节剂对酸枣叶片再生诱导的影响不同。细胞分裂素6-BA和TDZ都可以诱导酸枣叶片再生,6-BA诱导叶片形成的愈伤组织少,叶片直接再生不定芽,大多数生长为枣吊,TDZ诱导叶片形成的愈伤组织多,叶片通过愈伤组织再生不定芽,大多数生长为枣头,细胞分裂素宜选用TDZ,浓度为0.5 mg/L。低浓度的生长素可以诱导酸枣叶片再生,最适生长素为IBA 0.1 mg/L。(3)适合酸枣叶片再生不定芽的培养基为MS+TDZ 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L,不定芽再生率为93.57%,平均出芽数为4.23。(4)适合酸枣叶片再生不定芽伸长生长的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA3 0.5 mg/L,GA3显著提高不定芽伸长的效果。(5)适合酸枣叶片再生植株增殖的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L,平均伸长为3.07 cm,增殖系数为6.13。(6)适合酸枣叶片再生植株生根的培养基为1/2MS+IBA 1.5 mg/L,生根率为67.92%,平均生根数为3.21。
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