唑类药物是目前临床和农业上应用最广泛的抗真菌物质,在真菌病及真菌病害的防控中发挥着重要作用。但真菌的耐药性问题却日趋严重,造成真菌感染几率增加和药物疗效降低。加深对真菌耐药机制的认识,将对合理用药和新靶点抗真菌药物的开发提供重要的理论依据。目前对真菌耐药机制的研究主要集中于白色念珠菌等酵母类真菌,与酵母类真菌相比较,丝状真菌对唑类药物转录响应的调控机制相关报道非常少,酵母类真菌中发现与药物耐受相关的转录因子在丝状真菌中作用完全不清楚。酵母中参与耐药调控的大部分转录因子在丝状真菌中没有相应的同源蛋白或其同源蛋白没有相同的功能,这暗示着丝状真菌中存在与酵母菌机制不同的唑类药物转录响应调控机制。而目前对丝状真菌应对唑类药物胁迫的转录调控却知之甚少；此外,麦角甾醇合成途径中对唑类药物转录响应的基因在真菌耐药性中的作用及机制亦不清楚,这些都是需要亟待回答的重要科学问题。基于此,本研究拟以模式丝状真菌粗糙脉孢菌Neurospora crassa)为材料,根据脉胞菌对唑类药物的转录响应研究数据,对唑类药物胁迫下大幅度增强表达的进行敲除,分析突变体对唑类药物的敏感性,从而发现参与对唑类药物耐受的新基因。同时以植物病原真菌轮枝镰刀菌(Fusarium verticillio ides)为材料,通过基因敲除及突变体的表型分析,明确新筛选到的新基因及其同源基因在丝状真菌耐药调控中的功能保守性。本研究取得了以下主要结果：1)通过对脉胞菌转录因子基因敲除突变体的药敏分析,发现2个突变体对酮康唑和伊曲康唑超级敏感,其相应的基因分别编码光诱导蛋白CCG-8和一假想蛋白,我们将此假想蛋白编码基因命名为ads-4(antifungal drug sensitive-4)。ccg-8敲除突变体对盐渗透压及氧化胁迫胁迫的敏感性与野生型相同,而ads-4敲除菌株对氧化胁迫超敏感,并且产孢量稍有降低。蛋白同源分析发现CCG-8及ADS-4的同源蛋白广泛存在在于其他丝状真菌中,植物病原真菌轮枝镰刀菌ccg-8和ads-4同源基因的敲除,均导致突变体对唑类药物的超级敏感,说明ccg-8和ads-4及其同源基因在丝状真菌耐药调控中功能保守。2)通过对麦角甾醇生物合成途径关键基因敲除突变体的药敏分析,发现erg5基因的缺失使脉孢菌对唑类药物的敏感性增强,敲除轮枝镰刀菌中erg5的同源基因并进行表型分析,证明同源基因fverg5在轮枝镰刀菌中也具有类似功能,暗示着ERG5可以作为新的靶标用于抗真菌药物的研发。以上结果加深了对丝状真菌耐药机制的理解,同时为新靶点抗真菌药物的研发提供了重要的理论依据。