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目的:本实验用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激U937细胞,构建炎症模型,研究单核细胞在炎症状态下microRNA-107与NF-kB信号通路的相关性,探讨二者在促进糖尿病神经病变患者炎症状态中的作用机制。方法:1.LPS不同刺激浓度对U937细胞炎症反应的作用。体外应用佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人巨噬细胞系 U937 细胞成熟。不同浓度的LPS(0.05-10μg/ml)刺激U937细胞,3小时后收集细胞团,使采用实时荧光定量 PCR 检测(quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-A,TNF-a)的基因变化情况,同时筛选LPS最佳作用浓度。2.LPS不同刺激时间对U937细胞炎症效应以及microRNA-107的作用。按照LPS刺激时间(10分钟、1小时、3小时、6小时)分为4组,每个时间点各设定对照组和LPS(10μg/ml)刺激组。用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)及 qRT-PCR 检测 microRNA-107 的变化以及炎症因子TNF-α、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)表达情况。3.LPS刺激U937细胞对NF-κ B(p65)的影响。按照LPS刺激时间(10分钟、1小时、3小时、6小时)分为4组,每个时间点各设定对照组和LPS(10μg/ml)刺激组。蛋白质免疫印迹技术(Western blot,WB)检测TLR4、p65、磷酸化p65(Ser536)蛋白含量。4.microRNA-107抑制剂对U937细胞炎症反应的作用。分组:对照组;抑制剂组;LPS组;LPS+抑制剂组。采用ELISA及qRT-PCR检测炎症因子TNF-α、IL-1β表达情况。结果:1.PMA诱导U937细胞24小时后,U937细胞成功贴壁并伸出伪足,随即加入LPS构建炎症模型,筛选出LPS浓度为10μg/ml。2.与无处理对照组比较,LPS刺激3小时及6小时组细胞microRNA-107、TNF-α、IL-1β mRNA 水平明显升高(p<0.01),TNF-α、IL-1β 表达含量均明显升高(p<0.05)。Spearman相关分析发现LPS刺激四组U937细胞microRNA-107 表达水平与 TNF-α mRNA(r=0.773,p<0.01)、IL-1β mRNA(r=0.801,p<0.01)呈正相关。3.1小时、3小时、6小时组U937细胞p-NF κ B p65(Ser536)/p65蛋白表达水平较无处理对照组升高(0.01)。Spearman相关分析LPS刺激四组U937细胞microRNA-107表达水平与p-p65(Ser536)/p65蛋白表达量(r=0.656,p<0.01)呈正相关。4.与对照组比较,LPS组microRNA-107、TNF-α和IL-1β表达量均上升(p<0.01);与 LPS 组比较,LPS+inhibitor 组 microRNA-107、TNF-α和 IL-1β表达量均显著下降(p<0.01)结论:LPS刺激PMA诱导的U937细胞microRNA-107的表达升高可能与NF-κB(p65)信号通路有关,并且microRNA-107抑制剂能够降低炎症因子的分泌。