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目的:通过乙酸(acetic acid,AA)腹腔注射诱导小鼠急性内脏痛模型,观察七氟烷联合利多卡因预处理对内脏痛行为、相关焦虑样行为和肠道菌群的影响。方法:将小鼠随机分为六区组:盐水+安慰剂组(Saline+Veh,n=40),盐水+乙酸组(Saline+AA,n=40),七氟烷+盐水+乙酸组(Sev+Saline+AA组,n=40),七氟烷+利多卡因1 mg/kg/h+乙酸组(Sev+L1+AA组,n=40),七氟烷+利多卡因3 mg/kg/h+乙酸组(Sev+L3+AA,n=40)和七氟烷+利多卡因5 mg/kg/h+乙酸组(Sev+L5+AA,n=40)。各组别40只小鼠分别随机分为预处理后1 h组,预处理后8 h组,预处理后24 h组和预处理后48 h组(每组n=10)。各实验组小鼠在预处理后不同时间点,分别接受腹腔乙酸(10 ul/g,1%)注射。利用乙酸扭体实验(acetic acid stretch assay,AASA)记录乙酸注射后30 min内小鼠腹壁收缩次数,利用旷场(open field text,OFT)和高架十字迷宫(elevated plus maze,EPM)实验检测乙酸注射2 h后小鼠焦虑样行为,利用16S r RNA(16S ribosomal RNA)测序检测预处理前、后小鼠粪便,分析肠道菌群变化。结果:(1)乙酸扭体实验:与Saline+AA组相比,Sev+Saline+AA组小鼠腹壁收缩次数明显减少;而相对于Sev+Saline+AA组,七氟烷联合利多卡因组小鼠腹壁收缩次数更少;与1 h、8 h和24 h相比,预处理后48 h小鼠腹壁收缩次数最少,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)旷场实验:与Saline+AA组相比,Sev+Saline+AA组小鼠中央区域活动时间显著增多;而Sev+L5+AA组小鼠中央区域活动时间比Sev+Saline+AA组更多,且相较于预处理后1 h、8 h和24 h,预处理后48 h小鼠中央区域活动时间增加最明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)高架十字迷宫实验:与Saline+AA组相比,Sev+Saline+AA组小鼠进入开放臂的次数和开放臂活动时间明显增多,而Sev+L5+AA组小鼠进入开放臂的次数及开放臂活动时间比Sev+Saline+AA组更多;与1 h、8 h和24 h相比,预处理后48 h小鼠进入开放臂的次数和开放臂活动时间增加最明显,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(4)16S rRNA测序实验:与正常小鼠肠道菌群相比,Sev+L5预处理后48 h小鼠肠道菌群的beta多样性(βdiversity)发生显著改变(P<0.05),而alpha多样性(αdiversity)未见明显变化(P>0.05)。进一步分析发现预处理后,变形菌门、蓝藻细菌、弯曲杆菌纲、Melainabacteria、弯曲杆菌目、Gastranaerophilales、螺杆菌科、螺杆菌属、unclassified_g_norank_f_Muribaculaceae、大肠杆菌g杆菌志贺氏杆菌和肠肝螺杆菌相对丰度显著升高(P<0.05);而芽孢杆菌目、葡萄球菌科、葡萄球菌属、罗伊氏乳杆菌种、缓慢葡萄球菌和木糖葡萄球菌相对丰度显著减少(P<0.05)。(5)相关性分析:将上述显著差异菌种与小鼠内脏痛和相关焦虑样行为中的腹壁拉伸次数、高架十字迷宫中的开放臂活动时间百分比进行相关性分析发现,七氟烷联合5 mg/kg/h利多卡因改变的肠道菌种与小鼠内脏痛行为和相关焦虑样行为无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:七氟烷预处理可缓解小鼠内脏痛和焦虑样行为,而七氟烷联合利多卡因预处理缓解小鼠内脏痛和焦虑样行为更加明显,表现为七氟烷联合5 mg/kg/h剂量的利多卡因提前48 h预处理发挥的抗焦虑效果最显著,提示静脉泵注利多卡因可以发挥镇痛及抗焦虑的佐剂作用;此外七氟烷联合5 mg/kg/h利多卡因预给药后48 h会显著影响小鼠肠道菌群的多样性和种类,然而进一步的分析未发现这些预处理后显著变化的菌群与内脏痛行为以及焦虑样行为明确相关,提示七氟烷联合利多卡因预处理发挥的镇痛及抗焦虑作用可能是通过肠道菌群非依赖性的机制介导,值得进一步研究。