目前普遍认为肝细胞癌(HCC)经治疗后复发的细胞起源有二种不同的机制即多中心发生和单中心发生或肝内转移。这也是造成 HCC 高复发率的原因。多中心起源是由于 HCC 的发病原因与慢性病毒性肝炎以及肝炎引起的肝硬化密切相关,手术切除病灶后余下的病肝仍有生长肝癌的可能;肝内转移则是肝癌细胞具有极强的侵袭性,容易突破肿瘤包膜浸润门静脉系统造成肝内转移,手术切除很难做到真正的根治,术后余肝内出现复发病灶。 可是严格适应症后的肝移植治疗 HCC 出现的移植肝内肿瘤复发,用这二种机制解释似乎有些勉强。移植术切除整个病肝,消除了肝内转移灶和潜在生癌的“土壤”,达到了真正的根治。虽然免疫抑制剂可促使肿瘤细胞生长,但其本身并不导致癌的发生。本课题建立大鼠肝癌肝移植模型,观察 HCC 复发的特点,并通过供受体性别差异,判断移植肝内复发的 HCC 起源于受体还是供体。在此基础上尝试提出一种有别于多中心和肝内转移的新机制。而这种机制可能在肝切除术后复发中亦存在。第一部分:大鼠肝癌肝移植模型的建立及术后肝癌复发的特点 本部分目的是建立稳定的肝癌肝移植动物模型并观察术后肝癌复发的生物学特点。130 只雄性 SD 大鼠,100ppm 二乙基亚硝胺饲喂诱癌。健康雌性 SD 大鼠作供体,共 98 只大鼠据 Kamada 袖套技术行原位肝移植。术后不给免疫抑制剂。术中根据肿瘤大小分三组:1 组有明确肝癌结节但直径<1.0cm(n=25),2组肝癌结节直径 1.0-1.5cm(n=41),3 组肝癌结节直径>1.5cm(n=32)。不行肝移植术的 10 只大鼠作对照组。三组大鼠肝移植术中死亡率 26.5%(26/98),术后 30d 累计死亡率 71.5%(70/98)。术后存活 30d 后计算平均生存期,1 组81.3±33.2d,2 组 67.6±24.9d,3 组 54.4±24.9d。对照组从诱癌开始 150d 后计算,平均生存期为 29.4±12.9d。术后肝癌复发率 35.7%(10/28),单纯移植肝内复发7.1%(2/28),肝和肺同时复发 10.7%(3/28),肝和腹腔同时复发 3.6%(1/28),单纯腹腔肿瘤 7.1%(2/28),单纯肺部肿瘤 7.1%(2/28)。1,2,3 组肿瘤复发率分别为 12.0%,12.2%,12.5%,之间无明显差异。肝内复发率 60.0%(6/10),病理发现 3 个复发的移植肝内共散在 13 个肿瘤,未见腹腔内复发的肝癌直接侵 1<WP=5>第二军医大学临床博士学位论文 中文摘要犯移植肝。结果提示大鼠肝癌肝移植良好地模仿了临床过程,但诱癌大鼠体质差导致术中和术后短期死亡率高。大鼠术后长时间存活是观察到肿瘤复发的重要条件,但与术前肿瘤大小不相关。肝癌复发部位以移植肝内为主。第二部分:移植肝内复发肝细胞癌起源的研究本部分旨在探寻移植肝内肝细胞癌复发的细胞起源。6 只受体大鼠移植肝内出现肝癌复发,3 只因死亡时间过长标本弃用,另 3 个可用移植肝共 13 个肿瘤在大鼠存活时取下保存在-70℃。大鼠 sry 基因序列作模板,随机引物法通过 PCR制备能特异性与大鼠 Y 染色体结合的地高辛标记的 DNA 探针,原位杂交的方法检测肝内复发肝癌细胞核中的 Y 染色体。雄性大鼠正常肝组织和肝癌组织作阳性对照,雌性大鼠肝组织和未标记的 DNA 探针作阴性对照。冰冻切片杂交后光学显微镜下观察,淡紫红色背景下细胞核内蓝色信号为阳性信号。阳性对照出现阳性信号,阴性对照则未发现。受体的雌性移植肝内复发的肝癌细胞出现阳性信号,而其癌旁组织则未见阳性信号。结果提示雌性移植肝内复发的肝癌起源于雄性受体大鼠本身而不是移植肝本身。结论1.大鼠肝癌肝移植模型模仿了临床过程,移植肝是肝癌肝移植后复发的最常见部位。2.移植肝内复发的肝癌起源于受体内细胞而不是移植肝本身。3.复发的起源可能是移植前受体内已播散的癌细胞,移植后这些细胞又归巢至移植肝本身。4.这样一种可能存在的归巢机制在肝癌切除术后复发中可能同样存在。潜在应用价值1.这种区分肝癌细胞起源的方法可以在临床应用。2.提出的肝癌细胞归巢机制可能是肝癌治疗后高复发率的原因之一,为临床抗复发治疗选择提供新的依据。创新点1.巧妙地利用了供受体性别差异来区分细胞的起源。2.首次提出的肝癌复发的归巢机制,但需通过分子生物学深入研究证实。