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目的 检测人脑胶质瘤组织中及胶质瘤细胞系富亮氨酸胶质瘤失活基因1(LGI1)有无微卫星杂合性缺失(LOH)及构建LGI1质粒(pcDNA3.1/LGI1),研究该基因与胶质瘤的关系。 材料与方法 1.收集天津市环湖医院、天津市第一中心医院神经外科手术切除的新鲜胶质瘤组织标本25例,同时收集每例患者的血标本。另外收集脑外伤减压术中切除的脑组织1例,用作对照。另外还选择5种胶质瘤细胞系(C6、TJ905、A172、U251、H4)用于体外实验研究。 2.提取组织标本、血细胞及体外培养细胞系的基因组DNA。参照文献设计并合成特异性引物,扩增LGI1微卫星序列,凝胶电泳银染分析,如发现异常泳动条带,则进行DNA测序。采用原位杂交和免疫组化技术检测胶质瘤细胞系U251、A172有无内源性LGI1基因表达异常。 3.构建pcDNA3.1/LGI1,采用脂质体介导的方法转染LGI1表达缺失的胶质瘤细胞系A172,用RT-PCR和免疫组化方法对被转染细胞LGI1的mRNA转录和蛋白表达水平进行检测,测定MTT吸收值以观察被转染细胞的增殖活性变化,Annevin V-FITC法检测被转染细胞的凋亡状态。 结果 在25例胶质瘤标本及5种细胞系中均未检测到LOH。A172未见内源性