虾肝肠胞虫的流行病学及防控技术的研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wayaya001
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近些年来,对虾生长缓慢的现象频发,特别是在东南亚地域,有越来越多的关于对虾生长迟缓的情况相继被报道。这些生长迟缓的对虾中大都可以检测到虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)。EHP是一种能引起对虾生长缓慢的病原,2004年最早发现于泰国养殖的斑节对虾(Penaeus monodon)中,2009年被正式命名报道。EHP自被发现以来,给对虾养殖业的产量增长造成了重大影响,大大降低了养殖户的经济效益。本研究通过EHP并样检测方法的评价、养殖场养殖过程的EHP的持续跟踪检测、防治EHP药物初步筛选试验等几个方面,目的在于评价一种高效快速的检测EHP的技术手段,了解EHP在整个养殖过程中的动态变化,明确实际养殖生产中影响EHP流行的因素,初步筛选出几种EHP的有效药物。为了实现对EHP的定量检测,本实验室刘雅梅等建立了TaqMan探针法实时荧光定量PCR用于检测EHP。经实验证实,此方法达到了检测方法的标准,能够用来定量检测实际样品。然而在实际的定量检测方法应用中,因为流行病学调查的样品量大,若每份样品均进行单尾检测,工作量是巨大的,因此,为了减少检测工作量和成本,扩大EHP流行病学调查的覆盖范围,本文评价了一种基于TaqMan qPCR检测凡纳滨对虾样品中EHP并样检测的技术方法,并希望用该技术去检测接下来采样调查中采集的对虾样品。该方法极大的缩短了检测时间,节省了检测费用,为对虾EHP的流行病学研究提供了简便快速的方法。为了解EHP在整个养殖过程中的动态变化,本研究对山东海阳和潍坊的2家凡纳滨对虾养殖场进行了持续性跟踪调查,测量了整个养殖过程中几个时间点的对虾生长参数,用TaqMan qPCR检测了2个养殖场不同时间点各群体对虾的EHP感染载量。结果表明,2个群体在不同养殖时间的EHP阳性率和载量均有不同程度变化,且EHP变化规律存在较大差异。接着对体长与EHP载量之间的关系作进一步分析,结果表明在养殖过程中某一时间点的EHP载量与对虾生长状况并不一定能表现出固定相关性特征,但按正态峰子群进行分析,在这些子群体的个体集中基本均能表现出了EHP对数与体长的负相关性,且每个批次的主体部分均不同程度地显示出这种负相关性具有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的意义,这能解释前期研究中群体的EHP与对虾生长参数呈现显著负相关性。对2个群体不同养殖阶段所采集的样品的EHP对数的分布进行高斯分布分析,2个群体阳性样品的EHP对数分布范围上,山东海阳(HY)群体普遍大于同时期山东潍坊(WF)群体,这表明WF群体中各时期的EHP感染水平较为接近,HY群体相应时期的EHP感染水平差异大。目前尚无EHP有效药物的公开报道,本研究在前期工作中开展了EHP药物筛选工作,首次找到了2种对EHP有效的驱虫药物,药物浸泡和投喂均可有效降低虾体中EHP的病原载量,因此本论文在此基础上,通过养殖实验,分析用药前后EHP载量的变化,进一步进行了EHP有效药物的初步筛选,为以后研究防治EHP药物提供了基础数据。
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