论文部分内容阅读
热应激诱导氧化应激,严重影响肉鸡生长性能和健康。EGCG是茶多酚的重要成分,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等生物学作用。本研究将从体外和体内两个方面来探讨EGCG能否缓解肉鸡遭受的热应激及可能的作用机制,为缓解热应激提供理论支持。试验一:EGCG对热应激肉鸡生长性能和抗氧化系统的影响。192只2周龄Arbor Acres(AA)broilers肉鸡分为4处理,对照组为适宜温度组(28℃,TN组),饲喂基础日粮,实验组为循环高温组(白天07:00h到19:00h35℃,晚上19:00到早上7:00 28℃,HS组),实验组日粮在基础日粮中分别添加0mg/kg(HS0组)、300mg/kg(HS300组)、600mg/kg(HS600组)EGCG。每处理6重复,每重复8只鸡。实验期3周,实验结束时测定分析肉鸡生长性能指标、血清代谢物、肝脏的氧化应激指标(SOD、GSH-Px、CAT、MDA)及肝脏AMPK/SIRT1能量信号通路相关的抗氧化蛋白的表达。研究结果表明,热应激条件下,肉鸡的体重、日增重和日采食量显著降低(P<0.05),肝脏的GSH-Px(35日龄)、SOD(21、28、35日龄)、CAT(28日龄)活性,血清葡萄糖含量、血清碱性磷酸酶的活性和p-AMPKα、Sirt1、PGC-1α及UCP3、Nrf2蛋白表达显著下降,而21日龄CAT活性及肝脏MDA(21、28、35日龄)含量,血清尿酸、胆固醇、甘油三酯含量,以及肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性、谷草转氨酶活性以及HSF1和NOX2蛋白表达显著增加(P<0.05);热应激肉鸡添加300 mg/kg、600 mg/kg EGCG后,体重、日增重和日采食量显著增加(P<0.05),肝脏SOD、GSH-Px和CAT活性,血清葡萄糖、碱性磷酸酶及p-AMPKα、Sirt1、PGC-1α及UCP3、Nrf2蛋白的表达显著增加,而血清胆固醇、甘油三酯和MDA含量以及乳酸脱氢酶、肌酸激酶、谷草转氨酶活性及NOX2和HSF1蛋白表达显著下降(P<0.05)。相关分析表明,热应激条件下AMPK、Sirt1、PGC-1α、Nrf2蛋白表达与抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT活性呈显著正相关(P<0.05),而与HSF1蛋白表达呈显著负相关(P<0.05)。本研究结果表明,EGCG通过AMPK/SIRT1-PGC-1α途径作用调控抗氧化蛋白(Nrf2、NOX、UCP3、HSF1)的表达及提高抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性,缓解肉鸡热效应,提高肉鸡生产力。试验二:EGCG及热应激对成肌细胞抗氧化性能的影响。研究EGCG对热应激处理的成肌细胞是否具有保护作用。不同浓度EGCG(0,10,20,30,40,50 umol/L)加入到细胞中以及不同浓度EGCG共热应激培养细胞,CCK-8进行活力检测并筛选出EGCG的最佳保护作用浓度(25μmol/L)。将细胞分为4组:常温组(TN,37℃),(2)热应激组(HS,41℃),(3)EGCG保护组(HS25),(4)EGCG保护+10μmol/L Compound C组[HS25(-)]。用RT-PCR法检测基因PGC-1α、Nrf2、SOD1、GPx1 mRNA的表达。研究结果表明,热应激处理成肌细胞12h后,细胞活力与常温组相比降为74.41%(P<0.05),加入不同浓度EGCG后,成肌细胞活力有所上升,25μmol/LEGCG为最佳保护浓度。PGC-1α、Nrf2、SOD1、GPx1 mRNA的表达在HS组和HS25组表达明显上升,较TN组有统计学差异(P<0.05)。在HS25组中加入Compound C后,各基因表达显著下降。EGCG可通过调节抗氧化基因表达缓解热应激效应,提高细胞存活率。本项研究表明,热应激导致肉鸡生产性能下降,肝脏抗氧化酶活力下降,并使血清代谢物发生变化,导致组织结构损伤;饲粮中添加EGCG可改善上述热应激效应,EGCG缓解热应激的作用机制与AMPK、Sirt1、PGC-1α及抗氧化基因的表达相关。