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第一部分Prdx5在骨关节炎软骨的表达目的：检测Prdx5在骨关节炎软骨组织中的表达情况。方法：1. Western blot, qRT-PCR方法检测Prdx5在人骨关节炎软骨组织与正常骨关节软骨组织中的表达情况。2. Western blot方法检测MMP-13蛋白在人骨关节炎软骨组织与正常骨关节软骨组织中的表达水平。结果:1.骨关节炎软骨组织Prdx5 mRNA的表达量为正常骨关节软骨组织中Prdx5 mRNA表达量的3.5±0.21倍(P<0.05)。骨关节炎软骨组织中Prdx5蛋白表达水平比正常骨关节软骨组织高2.31±0.18倍(P<0.05),提示Prdx5 mRNA和蛋白的表达水平在骨关节炎软骨组织中与正常的骨关节软骨组织相比明显升高(P<0.05)。2. Western blot检测结果显示在骨关节炎软骨组织中MMP-13蛋白的表达水平与正常的骨关节软骨组织相比明显升高(P<0.05)。结论：Prdx5与MMP-13在骨关节炎软骨组织中均高表达,可能与骨关节炎的发生发展密切相关。第二部分Prdx5对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响目的：观察抑制Prdx5表达后骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的变化情况。方法：1.通过流式细胞术检测Prdx5表达抑制后骨关节炎软骨细胞凋亡的变化,MTT法检测Prdx5表达抑制后骨关节炎软骨细胞增殖的变化。2.采用ROS检测试剂盒检测Prdx5表达抑制后骨关节炎软骨细胞中ROS的含量变化。3.通过流式细胞术、MTT法检测抗氧化剂NAC对Prdx5表达抑制的骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖特性的影响。结果：1.流式细胞仪检测结果提示骨关节炎软骨细胞在Prdx5表达抑制后的凋亡率较对照组明显增加(P<0.05),MTT检测结果显示：与对照组相比,转染Prdx5 shRNA的骨关节炎软骨细胞的增殖能力明显降低。2.ROS检测结果提示在Prdx5表达有效抑制后,骨关节炎软骨细胞内ROS的含量与对照组相比显著增加(P<0.05)。3. Prdx5表达有效抑制后的骨关节炎软骨细胞加入抗氧化剂NAC作用24 h后,骨关节炎软骨细胞的增殖能力显著增强,凋亡率明显下降(P<0.05)。结论：Prdx5表达有效抑制后,导致骨关节炎软骨细胞内ROS的含量增加,从而致使骨关节炎软骨细胞增殖抑制和凋亡增加。第三部分Prdx5调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的机制目的：观察Prdx5表达有效抑制后Wnt/p-catenin通路关键因子的变化情况,探讨Prdx5对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡影响的作用机制。方法：1. Prdx5 shRNA转染骨关节炎软骨细胞后应用Western blot方法检测Wnt/β-catenin通路核心蛋白β-catenin在细胞核和细胞质中表达水平的变化以及其它关键因子Wnt-4, Frizzled-2, GSK-3β, p-GSK-3βser9, p-β-cateninser33/37与下游目的基因CyclinD1,MMP-13的蛋白表达情况；qRT-PCR检测CyclinD1, MMP-13 mRNA表达变化情况。2.通过细胞免疫荧光实验检测Prdx5沉默后Wnt/p-catenin通路核心蛋白β-catenin在骨关节炎软骨细胞内的定位变化。3.应用TOPflash荧光素酶报告基因系统检测Prdx5沉默后Wnt/β-catenin通路核心蛋白β-catenin转录活性的变化情况。4. Western blot方法检测Prdx5 shRNA转染正常骨关节软骨细胞后Wnt/β-catenin通路核心蛋白P-catenin在细胞核和细胞质中表达水平的变化以及该通路其它关键因子GSK-3β, p-β-cateninser33/37的蛋白表达情况。5.采用Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939作用于转染Prdx5 shRNA的骨关节炎软骨细胞后,通过ROS检测试剂盒观察细胞内源性ROS含量的变化情况。结果：1. Western blot结果显示：Prdx5表达有效抑制后,骨关节炎软骨细胞中β-catenin蛋白表达水平在细胞核中明显升高,细胞质中明显降低(P<0.05)；而骨关节炎软骨细胞中β-catenin的总蛋白水平在Prdx5抑制前后无明显变化；p-β-cateninser33/37和GSK-3β的蛋白表达水平在Prdx5抑制后明显降低,Wnt-4, Frizzled-2, p-GSK-3βser9, CyclinD1与MMP-13的蛋白表达水平则显著升高(P<0.05)；qRT-PCR结果提示CyclinD1和MMP-13 mRNA表达在Prdx5抑制后显著升高(P<0.05)。2.细胞免疫荧光结果显示：Prdx5的表达有效抑制后,骨关节炎软骨细胞核内的P-catenin的荧光强度较对照组明显增强,说明骨关节炎软骨细胞中的P-catenin由细胞质移位到细胞核。3.荧光素酶报告基因系统检测结果显示Prdx5基因沉默后,骨关节炎软骨细胞中β-catenin的转录活性显著升高(p<0.05)。4. Western blot结果显示：Prdx5 shRNA转染正常骨关节软骨细胞后,Wnt/β-catenin通路核心蛋白β-catenin在细胞质和细胞核中的表达水平以及该通路其它关键因子p-β-cateninser33/37,GSK-3β的蛋白表达水平没有明显变化。5.ROS检测结果提示：单独应用XAV-939能明显降低骨关节炎软骨细胞的ROS含量(P<0.05),然而XAV-939与Prdx5 shRNA共同作用于骨关节炎软骨细胞后,ROS的含量没有进一步降低。结论：Prdx5表达抑制后能上调Wnt/β-catenin信号通路,Prdx5可能通过调控Wnt/β-catenin通路从而影响骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡。