【摘 要】
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代谢酶如硝基还原酶和碱性磷酸酶等催化人体内各种各样的新陈代谢反应,也维持着机体内物质的代谢平衡。实时准确地检测代谢酶的活性/水平对我们了解生理和病理学过程至关重要。聚集诱导发光(AIE)型荧光探针具有检测灵敏度高和光稳定性好等优点,本文设计制备了两种AIE型荧光探针分别用于检测硝基还原酶和碱性磷酸酶,主要内容如下:(1)设计制备了基于三苯胺的AIE型荧光探针TPA-Py-NO2,用于硝基还原酶(N
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代谢酶如硝基还原酶和碱性磷酸酶等催化人体内各种各样的新陈代谢反应,也维持着机体内物质的代谢平衡。实时准确地检测代谢酶的活性/水平对我们了解生理和病理学过程至关重要。聚集诱导发光(AIE)型荧光探针具有检测灵敏度高和光稳定性好等优点,本文设计制备了两种AIE型荧光探针分别用于检测硝基还原酶和碱性磷酸酶,主要内容如下:(1)设计制备了基于三苯胺的AIE型荧光探针TPA-Py-NO2,用于硝基还原酶(NTR)的检测。在甲氧基三苯胺的基础上,通过铃木偶联、克脑文盖尔缩合等反应合成荧光团TPA-Py,然后将硝基还原酶的识别基团2-苄基-5-硝基呋喃引入,得到荧光探针TPA-Py-NO2。对探针TPA-Py-NO2的结构进行了表征,并对其检测性能进行了考察。当探针与硝基还原酶反应,TPA-Py-NO2上的硝基被还原成氨基,从而引起识别基团消去,释放出荧光团分子TPA-Py,在650 nm处发出强荧光。该探针还可用于活细胞和小鼠肿瘤中对硝基还原酶的荧光成像。(2)设计制备了基于四苯基乙烯的AIE型荧光探针TPE-CN-pho,用于碱性磷酸酶(ALP)的检测。在四苯基乙烯的基础上,通过铃木偶联等反应合成荧光团TPE-CN-OH,再用碱性磷酸酶的识别单元磷酸基团修饰荧光团,使之成为荧光探针TPE-CN-pho。对探针TPE-CN-pho的结构进行了表征,并对其检测性能进行了考察。在水相中,该荧光探针与碱性磷酸酶反应后,探针分子上的亲水性磷酸基团被降解而离去,生成水溶性差的酶促反应产物TPE-CN-OH,在水中迅速聚集而发射出绿色荧光(发射波长为543 nm)。探针对碱性磷酸酶响应后,荧光强度增强了9倍。该探针可应用于对活细胞中内源性碱性磷酸酶的荧光成像。
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