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目的:从行为学、形态学以及分子生物学三个维度,对针刺治疗坐骨神经疼痛展开机制探讨。通过对热痛阈值的测算、损伤段坐骨神经的染色分析及血清和神经损伤标志物的表达,探索针刺是否能够激发SOCS1抑制疼痛信号的传导,进一步观察JAK-STAT信号通路相关的蛋白表达在针刺治疗坐骨神经痛中的作用机制。探究“担截”理论在治疗坐骨神经痛中的理论意义。材料与方法:1动物实验1.1动物分组SPF级SD大鼠共32只,随机进行分组,分别为空白组、模型组、环跳常规针刺组、天星组,每组8只。1.2实验模型制备适应性喂养7天后开始造模,除空白组外,其余3组制备大鼠坐骨神经损伤疼痛模型均采用经典钳夹损伤致痛法。并于造模24小时后(开始干预之前),对模型成功与否进行评价,选用“大鼠足印迹”结合热刺痛仪的方法综合对4组实验大鼠坐骨神经运动功能进行评价和分析。1.3各组干预方法造模24小时后,观察大鼠有无异样,并着手开始进行针刺治疗。(1)空白组:不进行任何干预,正常饲养。(2)模型组:不进行任何干预,正常饲养。(3)环跳常规针刺组:用一次性尼龙扎带将SD大鼠固定在网格盖上,待大鼠稳定对造模同侧的环跳穴进针治疗,选用针具为华佗牌φ0.18*33mm,针刺深度为9-11mm,单手指切法直刺进针,采用平补平泻的针刺手法,治疗时间为20min/次,连续治疗14天。(4)天星组:用一次性尼龙扎带将SD大鼠固定在网格盖上,待大鼠稳定对造模同侧的环跳穴以及同侧的阳陵泉穴进针治疗,穴位选取依据马丹阳“天星十二穴”,选用针具为华佗牌φ0.18*33mm,其中环跳穴针刺深度为9-11mm,阳陵泉穴针刺深度在4-6mm,两穴均单手指切法直刺进针,采用平补平泻的针刺手法,治疗时间为20min/次,连续治疗14天。1.4取材和指标检测针刺干预结束后的第二天,即取材前,对治疗后各组所有实验大鼠坐骨神经运动功能进行评价。(评价方法同造模评价方法,SFI、PWTL)大鼠麻醉成功后首先腹主动脉取血,ELISA检测离心后血清中的SOCS1、IL-6。取血后摘取因造模损伤的坐骨神经段每组各4条放入4%多聚甲醛中固定,另外4条装在EP管放入-80度冰箱冷冻存放待进行下一步检测。损伤段坐骨神经在透射电子显微镜下进行超微观察,再通过IHC法观察该组织中的JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达。最后,应用SPSS软件对所有结果进行统计分析。结果:1.实验大鼠坐骨神经运动功能结果钳夹法造模后(除未参与造模的空白组)各组大鼠坐骨神经功能指数显著下降(P<0.01)。经过14天治疗后,虽未恢复正常值,但与模型组比较,环跳常规针刺组和天星组的坐骨神经功能指数皆显著上升(P<0.01),天星组的上升程度高于环跳常规针刺组(P<0.05)。2.ELISA法对血清中SOCS1、IL-6的检测结果与空白组血清中SOCS1含量比较,模型组显著降低(P<0.01),与空白组血清中IL-6含量比较,模型组显著升高(P<0.01);相比模型组血清中SOCS1,环跳常规针刺组和天星组显著升高(P<0.01),天星组高于环跳常规针刺组(P<0.05);相比模型组血清中的IL-6,环跳常规针刺组和天星组显著降低(P<0.01),天星组低于环跳常规针刺组(P<0.05)。3.ELISA法对损伤段坐骨神经中JAK1、STAT3的检测结果与空白组坐骨神经中JAK1的表达进行比较,模型组显著升高(P<0.01);相比模型组损伤段坐骨神经中JAK1,天星组降低(P<0.01),天星组低于环跳常规针刺组(P<0.05)。同空白组坐骨神经中STAT3的表达进行比较,模型组显著升高(P<0.01);相比模型组造模段坐骨神经中STAT3,天星组降低(P<0.01),天星组低于环跳常规针刺组(P<0.05),差异具有统计学意义。4.各组大鼠坐骨神经HE染色结果空白组神经雪旺细胞完整,髓鞘及轴突排列整齐,神经纤维连贯;模型组髓鞘结构变形、神经纤维紊乱且有无髓神经纤维的出现,雪旺细胞不完整;环跳常规针刺组较模型组神经髓鞘结构有所恢复,但排列松散,有少量完整的雪旺细胞,神经纤维数量增多;天星组较环跳常规针刺组神经纤维结构较为完整,可见髓鞘厚度相对均匀,有髓神经纤维增多以及大量雪旺细胞增生,轴突生长良好。5.各组大鼠坐骨神经中JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3免疫组化结果免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测受损神经中的JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3。观察图中阳性表达为棕褐色,主要出现在胞浆内。若无明显着色则为阴性表达。与空白组比较,模型组中p-JAK1、p-STAT3活性状态明显;将环跳常规针刺组同模型组进行比较时,环跳常规针刺组中JAK1、STAT3、p-JAK1、p-STAT3的阳性表达减少,但不及天星组显著,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.常规针刺“环跳”穴能缓解坐骨神经疼痛,加快神经结构的恢复从而改善神经运动功能及传导功能。但效果不及天星组“环跳、阳陵泉”并用。说明针刺单一穴位能够减轻疼痛,但结合同一经脉上的经验要穴组成穴对则效果更为显著。2.针刺可激发SOCS1抑制JAK-STAT信号通路的传导;抑制JAK1、STAT3的磷酸化,进而减轻疼痛感觉,治疗坐骨神经疼痛。3.针刺能够降低血液中的炎症因子IL-6的含量,抑制炎性反应从而减轻疼痛,加速神经修复建设。4.坐骨神经痛可减轻大鼠体重,致大鼠精神萎靡,影响大鼠食欲,抖腿舔足等动作较无疼痛时频繁。