论文部分内容阅读
目的：探讨腺苷（adenosine）对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响。方法：分别以0、1.5、3.0、4.5mmol/L的腺苷干预SW480细胞72h后，采用亚硫酸氢盐测序（BSP）法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况；反转录PCR（RT-PCR）法检测hMLH1mRNA各组的表达情况；Western印迹（Western blot）法检测hMLH1蛋白经过干预后各组的表达情况；使用流式细胞术（FCM）检测各组的细胞凋亡率；分别以0、1.5、3.0、4.5mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96h后通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞活力。结果：（1）腺苷干预72h后，各组甲基化程度分别为（65±4）%、（45±11）%和（16±4）%，均明显低于对照组(80±4)%（P<0.01）；（2）腺苷干预前，hMLH1mRNA的相对表达量为0.079±0.010，随着腺苷浓度的增加，mRNA表达水平逐渐增加，分别为0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019（P<0.01）；（3）腺苷干预后，各组蛋白表达水平分别为0.353±0.016、0.654±0.018和0.854±0.014，均明显高于对照组0.126±0.016（P<0.01）；（4）腺苷干预后，各组凋亡率分别为(11.9±0.6)%、(20.0±1.8)%和(35.8±1.8)%，均明显高于对照组(3.9±1.4)%（P<0.01）；（5）MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后，各组细胞活力均明显低于对照组(均P<0.05)，有一定的时间-剂量依赖性。结论：腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态，使hMLH1mRNA及hMLH1蛋白表达增加，抑制细胞的增殖，促进细胞凋亡。