目的：构建Tie2基因启动子调控下的表达载体pTie2-apoE3-EGFP-N1;将带有该基因启动子的表达载体转染入人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中表达。方法：从人外周血基因组DNA中扩增出Tie2基因编码区5′端上游位置为(-917bp～123bp)的DNA片段,再以本研究所获得的重组载体pEasyT1-apoE3（将在下一节中详细讲述）为模板扩增得到人类apoE3基因，将上述片段按顺序插入真核表达载体pEGFP-Nl,通过转化大肠杆菌DH5α获取大量含有Tie2启动子融合apoE3的重组质粒pTie2-apoE3-EGFP-N1，用Lipofectamine2000转染试剂将重组质粒DNA瞬时转染HUVEC(人脐静脉内皮细胞),通过于转染后第24小时和48小时观察宿主细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况判断是否转染成功。结果：经过PCR,双酶切以及DNA测序分析,证实实验构建的携带Tie2启动子和apoE3基因的重组质粒pTie2-apoE3-EGFP-N1正确。转染细胞后的第24小时～72小时内，荧光显微镜下可见实验组和两组阳性对照组GFP的表达，转染成功率约为20～30﹪。阴性对照组未观察到绿色荧光。由此可以判断pTie2-apoE3-EGFP-N1重组质粒已成功转染HUVEC。结论：成功构建由Tie2启动子调控的表达载体pTie2-apoE3-EGFP-N1,并成功转染到了人脐带血静脉内皮细胞（HUVEC）中。目的:构建人类的载脂蛋白E基因的原核表达载体pET32a(+)–apoE3并进行原核表达分析；并通过构建小鼠apoE组织表达谱，为小鼠的apoE的研究及其动物模型的利用积累基础性的资料。方法:首先从人胚胎大脑皮层组织中提取RNA，逆转录获得cDNA后以其为模板，设计并合成引物从中扩增出载脂蛋白E的E3表型基因（以下简称apoE3）片段，插入原核表达载体pET32a(+)中，构建携带人类apoE3基因的原核表达载体pET32a(+)–apoE3。通过转化大肠杆菌DH5α实现大量扩增原核表达载体pET32a(+)–apoE3的大量克隆，再通过转化大肠杆菌BL21-DE3分析人类apoE3的蛋白表达情况。同时提取小鼠的肝、脑和心等17个组织的RNA，采用RT-PCR的方法对apoE在这些组织中的表达进行了研究。结果:构建的人类apoE3型基因的原核表达载体pET32a(+)–apoE3经酶切鉴定及测序鉴定，原核表达结果显示该载体能够在宿主菌中表达目的蛋白。在小鼠的组织表达谱中，apoE基因在肝组织表达最强，其次是脑和脊髓，心、肺、脾、肾、胃、小肠、胸腺、肾上腺、胰腺、膀胱、子宫、血液和动脉也有不同程度的表达，但在腹肌中几乎不表达。结论:成功地构建了人类apoE3型基因的原核表达载体pET32a(+)–apoE3,并证明了apoE3基因在宿主体内能够表达目的蛋白；小鼠的apoE基因组织表达谱与人的有较高的一致性，与猪的相比差异也不大。