【摘 要】
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目的:探讨过表达Lnc RNA 085865（long non-coding RNA,lnc RNA085865）能否调控巨噬细胞极化改善小鼠非酒精性脂肪肝肝损伤的作用研究。方法:第一部分探讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝肝功能的影响。髓系细胞特异性敲入小鼠（MYKI）的构建:WT背景下的Lyz2-Cre+/-小鼠与Lnc RNA 085865SA26/RO
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目的:探讨过表达Lnc RNA 085865（long non-coding RNA,lnc RNA085865）能否调控巨噬细胞极化改善小鼠非酒精性脂肪肝肝损伤的作用研究。方法:第一部分探讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝肝功能的影响。髓系细胞特异性敲入小鼠（MYKI）的构建:WT背景下的Lyz2-Cre+/-小鼠与Lnc RNA 085865SA26/ROSA26小鼠杂交,得到髓系细胞特异性敲入小鼠（MYKI）,同野生型（WT）小鼠作为对照组,分别给予普通饮食（10%脂肪）、高脂饮食（60%脂肪）喂养12周,每周测量小鼠的体重。喂养12周后,收集小鼠血液检测血清中相关肝功能指标:谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平;收集肝组织称量小鼠肝脏重量并取部分检测肝组织:谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。第二部分探讨讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠肝组织取小鼠肝组织脂肪变情况。行HE染色,观察小鼠肝脏脂肪变情况。第三部分探讨讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠肝组织巨噬细胞浸润情况。取小鼠部分肝组织行F4/80免疫组织化学染色分析肝组织巨噬细胞聚集情况;并行RT-q PCR和Elisa法检测肝组织炎症因子,M1极化标志物如:肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1-β（IL-1β）及白细胞介素6（IL-6）的表达水平,M2极化标志物白细胞介素10（IL-I0）、精氨酸酶1（arginase 1,Arg1）和几丁质酶-3样蛋白3（chitinase 3-like 3,Ym1）表达水平。第四部分探讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗作用,对12周小鼠行腹腔糖耐量实验和空腹胰岛素耐量实验,行Western blot检测:磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）表达水平。第五部分探讨过表达Lnc RNA 085865对HFD饮食诱导的小鼠肝细胞焦亡情况,行WB检测肝组织NLRC4、Caspase-1、Gasdermin D（GSDMD）蛋白的表达;试剂盒检测肝组织Caspase-1表达水平;免疫荧光检测肝组织活化的Caspase-1水平。结果:（1）过表达Lnc RNA 085865缓解小鼠HFD引起的肝损伤,体现在肝功能指标的降低（2）过表达Lnc RNA 085865改善HFD饮食的肝脂肪变,脂滴减少（3）过表达Lnc RNA 085865可以通过调控巨噬细胞缓解小鼠HFD引起的炎症反应,过表达Lnc RNA 085865可以使高脂饮食引起的巨噬细胞浸润减少,也可以降低巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6表达水平,也降低了肝组织TNF-α、IL-1β及INOS,使M1比值降低,M2比值增加（4）与对照组相比,过表达Lnc RNA085865可以缓解小鼠HFD引起的胰岛素抵抗,改善糖耐量异常,增加了p-Akt蛋白的表达量（5）过表达Lnc RNA 085865可以通过减少NLRC4炎症小体释放,缓解Caspase-1/GSDMD介导的肝细胞焦亡,减轻肝细胞焦亡。结论:Lnc RNA 085865可以减轻NAFLD引起的肝损伤,其可以通过减少肝脏中巨噬细胞浸润,并可以通过调控巨噬细胞从M1向M2极化,使巨噬细胞促炎因子的释放减少,一方面可以通过改善小鼠胰岛素抵抗,另一方面也可以通过减少炎症小体NLRC4表达,降低其通过Caspase-1/GSDMD通路减轻肝细胞焦亡,从而缓解NAFLD。
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