【摘 要】
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真核细胞基因组以染色质状态存在于细胞核内,基因的表达调控首先要在染色质水平发生变化.染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation)分析是近年发展起来检测蛋白因子在
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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真核细胞基因组以染色质状态存在于细胞核内,基因的表达调控首先要在染色质水平发生变化.染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation)分析是近年发展起来检测蛋白因子在体内与染色质的结合,进而为蛋白因子参与染色质水平基因转录调控提供证据的方法.本研究运用该方法分析了p53、CREB、c-Jun、p300和mSin3A等在热休克、紫外线、PHA诱导等环境条件下对Jurkat细胞中hsp90β基因启动子区染色质的结合情况.在此基础上,进一步研究了染色质重塑复合体SWI/SNF对hsp90基因启动子活性的影响.将SWI/SNF复合体核心亚基(BRM或BRG1)的表达质粒或显性负突变体质粒与hsp90基因启动子驱动的CAT报告质粒瞬时转染到Jurkat细胞中,通过竞争性RT-PCR的方法证实SWI/SNF复合体参与了hsp90基因组成性及热休克诱导表达.一、转录调控因子对hsp90β基因启动子区染色质的结合特性1、p53对hsp90β基因启动子区的结合通过DNA序列分析发现hsp90β基因启动子区含有p53结合位点.染色质免疫沉淀分析证实37℃、热休克及紫外线(UV)诱导条件下p53均结合于hsp90β基因启动子区p53结合位点.2、CREB和c-Jun对hsp90β基因启动子区的结合3、p300和mSin3A对hsp90β基因启动子区的结合二、SWI/SNF复合体参与hsp90基因表达调控1、BRM对hsp90α基因启动子活性的影响2、BRM对hsp90β基因启动子活性影响不显著3、BRG1对hsp90α基因启动子活性的影响4、BRG1对hsp90β基因启动子活性的影响5、p53在BRG1对hsp90β基因启动子活性调控中的作用
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