miR-29b-3p通过IL32-pAKT通路抑制口腔鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanyiblue
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是高侵袭性肿瘤,易向区域淋巴结转移,晚期可发生远处转移。本实验组已经证实OSCC侵袭前沿细胞中mi R-29b-3p的表达量降低。本研究的目的是探究mi R-29b-3p对OSCC侵袭前沿细胞迁移和侵袭能力的影响,并探究其作用机制。方法:OSCC细胞株UM-SCC6是清华大学协和医学院馈赠,本实验组已利用微流控芯片模型筛选UM-SCC6细胞株获得了OSCC侵袭前沿细胞并命名为UM-SCC6-M。在光镜下观察UM-SCC6和UM-SCC6-M的细胞形态,利用划痕实验和Transwell小室侵袭实验考察两种细胞迁移和侵袭能力,用Western blot检测β-CATENIN,AKT,p AKT等迁移侵袭相关蛋白标志物在两细胞中的表达,利用RT-q PCR验证mi R-29b-3p的表达。在两种细胞中进行mi R-29b-3p mimic/inhibitor的转染并用RT-q PCR检测转染效率后,考察mi R-29b-3p对UM-SCC6-M和UM-SCC6迁移和侵袭能力的影响。基于Western blot的结果,在UM-SCC6和UM-SCC6-M中,以及经过mi R-29b-3p inhibitor转染的UM-SCC6中加入AKT抑制剂MK-2206,考察其迁移和侵袭能力的变化。为深入了解mi R-29b-3p在OSCC中的作用机制,通过全基因表达谱分析预测mi R-29b-3p的下游靶基因。基于测序结果,利用RT-q PCR和Western blot检测UM-SCC6和UM-SCC6-M中IL32在基因和蛋白水平的表达,并检测mi R-29b-3p在基因和蛋白水平对IL32的调控能力。然后,在两细胞中分别进行IL32过表达和敲低质粒的转染,在检测转染效率后,利用划痕实验和Transwell小室侵袭实验考察IL32对UM-SCC6和UM-SCC6-M迁移和侵袭能力的影响,并一同考察MK-2206对IL32过表达后的UM-SCC6迁移和侵袭能力的影响。同时,检测IL32质粒转染各组细胞中AKT和p AKT蛋白表达量的变化。最后,在两细胞中进行mi R-29b-3p inhibitor/mimic和IL32的共转染,利用划痕实验和Transwell小室侵袭实验考察IL32对mi R-29b-3p的回复作用,并用Western blot检测各组细胞中AKT和p AKT蛋白表达的变化。结果:观察细胞形态,UM-SCC6呈“铺路石”样,细胞间连接紧密,成团块状生长;而UM-SCC6-M呈“成纤维状”,细胞间连接较为松散,个别细胞有伪足。划痕实验和Transwell侵袭实验显示UM-SCC6-M的迁移和侵袭能力均高于UM-SCC6。Western blot结果显示,UM-SCC6-M中SNAI1,p AKT等表达量较高;β-CATENIN,TWIST1,MMP2,AKT等表达量相差不大;p MEK表达量较低。同时RT-q PCR结果验证了UM-SCC6-M中的mi R-29b-3p表达量较低。在验证了mi R-29b-3p mimic/inhibitor的转染效率后,证实mi R-29b-3p mimic能够抑制UM-SCC6-M的迁移和侵袭,mi R-29b-3p inhibitor具有相反的作用。MK-2206能够抑制两细胞的迁移和侵袭能力,且能抑制mi R-29b-3p inhibitor的调控作用。全基因表达谱分析显示,IL32是mi R-29b-3p影响OSCC迁移和侵袭的下游靶基因。RT-q PCR和Western blot结果显示UM-SCC6-M中IL32在基因和蛋白水平表达量较高且mi R-29b-3p可在转录后水平调节IL32的表达。验证了IL32质粒转染效率后,证实IL32能够促进UM-SCC6的迁移和侵袭。AKT抑制剂MK-2206的加入证实IL32通过AKT信号通路发挥作用。最后,划痕实验和Transwell小室侵袭实验证实,IL32可回复mi R-29b-3p对OSCC细胞迁移和侵袭能力的影响。mi R-29b-3p inhibitor/mimic和IL32共转染的Western blot结果显示,IL32能够回复mi R-29b-3p对两细胞中AKT磷酸化水平的调控。结论:综上所述,OSCC侵袭前沿细胞中mi R-29b-3p的表达下调,mi R-29b-3p通过IL32-p AKT信号通路抑制OSCC细胞的迁移和侵袭。
其他文献
目的:氢溴酸伏硫西汀(Vortioxetine,VOR)是一种多作用模式的新型抗抑郁药。与其他抗抑郁药相比,VOR对抑郁症患者认知功能的改善率较高,但其具体机制仍不明确。VOR促进巨噬细
国有企业对于国家的经济持续发展和社会稳定都有积极影响,为了保证国有企业能够得到更有效的发展,政府会划拨专项资金用于国有企业的运营和发展。国有企业在管理和使用政府专
电池的SOC估计是电池管理系统的最重要的功能之一,是对电动汽车行驶里程的量化评估。由于复杂的电池动态和环境条件,现有的数据驱动电池状态估计技术无法准确估计电池状态。
我院为一所拥有650多张床位的地市级综合二级甲等医院,地处苏、鲁、豫、皖四省交界,年门诊量36万人次,全院总手术人数达6 000多例,其中,病区手术室共有护理人员29人,设科护士
国库集中支付是我国财政预算管理制度的重要改革之一。目前,高校已全面推行国库制度,它对高校的财务管理、预算管理、会计核算产生了较为深刻的影响。在实施过程中,国库集中
毋庸讳言,小学阶段实施口语教学能够使小学生在真实的交际环境中锻炼他们的语言能力,为此,新课标明确要求小学语文应当注重"口语交际"。本文着重阐明小学语文口语交际的教学
口服有机磷农药中毒患者如果服药量大,入院时往往很难插入胃管,此时急需切开洗胃才能彻底排毒、提高抢救成功率,笔者现将16例切开洗胃患者的护理配合报道如下.1 临床资料