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目的:提取分离三七蛋白，研究三七蛋白的生物体内外生物活性。 方法:采用缓冲溶液浸提法提取三七总蛋白，用盐析法和中空纤维膜过滤纯化三七蛋白。以Bradford法对三七蛋白的杂质含量进行检测，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定三七蛋白的分子量大小和三七蛋白热稳定性;将提取并初步纯化过的三七总蛋白作用于巨噬细胞RAW264.7，采用MTT法对三七蛋白的细胞毒性进行考察，用Griess法检测三七蛋白对细胞产生NO量的影响，酶联免疫吸附测定法检测三七蛋白对细胞分泌肿瘤坏死因子α和白介素6量的影响，从而研究三七蛋白对RAW264.7细胞在免疫方面产生的影响;取清洁级ICR正常雄性小鼠，随机分配为4组，即三七蛋白高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组，每组10只，各组每日灌胃给药一次，三七蛋白高、中、低剂量组分给予三七蛋白水溶液50、100、200 mg/kg，对照组给药纯净水20 ml/kg，连续灌胃给药30天。测定小鼠碳廓清实验中脾脏、胸腺和肝脏的脏器系数，计算廓清指数(K)以及吞噬指数(α)。测定血清溶血素水平，NK细胞的活性及T细胞的转化功能。 结果: 1、实验分析表明，缓冲溶液的pH对三七蛋白提取率有显著影响。实验所得最佳提取工艺:在4℃的条件下，按照料液比1∶10的比例提取，每次12小时，浸提2次，缓冲溶液的pH=9[1];用盐析法和中空纤维柱过滤所得的三七总蛋白纯度可达74.03％。 2、三七蛋白热稳定性实验结果表明，蛋白稳定性随着试验温度的升高产生改变，不同分子量三七蛋白的热敏感性也存在差异，温度为70℃条件下，各分子量蛋白的含量基本不因加热时间而产生改变[1]。 3、三七总蛋白的分子质量分布为14.4kDa～66.2kDa之间，其中26.0kDa～45.0kDa范围内的三七蛋白含量最高。 4、细胞毒性试验中细胞存活率均在90.00％以上。 5、数据分析可知，细胞吞噬能力与三七蛋白浓度呈量效关系，各组OD值均小于阳性对照组，表明三七蛋白能够增强巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力(p＜0.01) 6、试验结果说明，空白组的RAW264.7细胞生成的NO量为6.68±0.87μmol/L，是最低值，阳性对照为27.97±1.10μmol/L，是最高值，实验组的RAW264.7细胞生成NO的量与三七蛋白浓度成正相关。三七蛋白样品组结果明显高于空白组(p＜0.01)但低于阳性对照组。 7、实验组中，数据表明不同剂量组RAW264，7细胞分泌的IL-6浓度，与空白组相比都处于较高水平，且差异显著(p＜0.01)，由此可以推测三七蛋白能促进该细胞分泌IL-6。 8、数据表明不同浓度的三七蛋白对RAW264.7细胞分泌TNF-α(p＜0.01)都有正向作用，当三七蛋白浓度达到200μg/mL时，TNF-α的测定结果高达空白组的十倍量，为3.41±0.32ng/mL。数据同时表明三七蛋白组的TNF-α浓度与阳性对照组相比，结果要低于阳性组，由此可以看出三七蛋白对RAW264.7细胞分泌TNF-α的促进作用较为缓和。 9、三七蛋白高、中、低各个剂量组均能明显提高雄性小鼠的肝脏系数和胸腺系数(P＜0.01，P＜0.05)，其中高剂量组的作用尤其明显(P＜0.01)，中剂量组的三七蛋白对胸腺、肝脏、脾脏的指数均有明显增强作用(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05)，低剂量组三七蛋白对脾脏和胸腺系数均无明显影响，但可以明显增强肝脏系数(P＜0.05) 10、高、中剂量组三七蛋白可明显提高雄性小鼠的吞噬指数K和吞噬活性α(P＜0.05，P＜0.01)，而低剂量组的三七蛋白样品对脾脏和胸腺系数均无明显影响(P＞0.05)。 11、高、中、低剂量组的三七蛋白样品均可明显提高雄性小鼠的血清溶血素的产生(P＜0.05，P＜0.01)，而高、中剂量的三七蛋白组的影响尤其明显(P＜0.01)。 12、高、中剂量组的三七蛋白样品均可明显增强雄性小鼠的T细胞转化能力(P＜0.01)。低剂量组三七蛋白对雄性小鼠的T细胞转化影响不明显(P＞0.05)，不具有统计学意义。 13、高、中剂量组的三七蛋白样品均可明显提高对雄性小鼠的NK细胞活性(P＜0.05，P＜0.01)，而低剂量组三七蛋白对雄性小鼠的T细胞转化影响不明显(P＞0.05)，不具有统计学意义。 结论: 工艺实验中由实验所得的三七蛋白提取工艺，优化得到的数据合理，重复性良好，蛋白纯度较高，可为三七蛋白后期的的工艺研究和蛋白热稳定性研究提供实验依据; 细胞试验中，三七蛋白可增强RAW264.7细胞的吞噬能力及对NO、细胞因子IL-6和TNF-α的分泌，从而增强巨噬细胞识别、破坏和吞噬机体内抗原物质的能力，促进其免疫激活和免疫递呈，进一步提高机体的细胞免疫活性; 小鼠免疫功能实验结果表明三七蛋白能明显增强小鼠脏器系数、碳廓清试验中的吞噬指数和吞噬活性，可以促进血清溶血素的生成、T淋巴细胞增殖以及提高NK细胞活性，由此三七蛋白从体液免疫和细胞免疫两方面增强了小鼠的免疫功能。