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目的:造血细胞激酶(Hematopoietic Cell Kinase,Hck)能够参与炎症反应的调节。本研究旨在通过建立高脂饮食诱导的胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)的动物和细胞模型,分析肝脏组织和肝细胞中Hck及IR相关指标的表达变化,探讨Hck在高脂诱导的肝脏IR中的作用及机制。方法:1.高脂饮食(High fat Diet,HFD)和普通饮食(Normal diet,ND)喂养4周龄C57BL/6J小鼠,建立肥胖相关IR动物模型和对照组;利用HE及油红O染色检测小鼠肝内甘油三酯(Triglyceride,TG)蓄积;采用免疫印迹(Western Blot,WB)分析两组小鼠肝组织中胰岛素蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)、p-AKT、糖原合成酶激酶(Glycogen Synthase Kinase3β,GSK3β)、p-GSK3β、Hck水平。2.棕榈酸(Palmitate,PA)处理人肝癌细胞系Hep G2建立肝脏IR细胞模型;在PA处理后的Hep G2细胞中,利用WB分析AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、Hck蛋白表达水平,Real-time PCR检测糖异生相关基因PEPCK、G6Pase表达情况;3.转染Hck-si RNA质粒,将敲低Hck表达。在Hck敲低的PA刺激的Hep G2细胞中,利用WB分析AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、Hck的水平变化;Real-time PCR检测糖异生相关基因PEPCK、G6Pase表达情况;4.WB检测Hck敲低前后Hep G2细胞中细胞外信号调节激酶(Extracellular Signal-Regulated Kinases,ERK)-转录因子核因子κB(Nuclear FactorκB,NF-κB)信号通路的变化;加用ERK抑制剂U102后对Hck表达水平及ERK-NF-κB信号通路的影响;利用ELISA检测PA诱导的Hep G2细胞中炎症因子肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α、白介素6(Interleukin-6,IL-6)的表达情况。结果:1.HFD组小鼠体重、TG明显高于ND组;HFD组小鼠糖耐量受损;HE及油红O染色显示高脂诱导的肝脏组织中脂质聚集;WB结果显示HFD组p-AKT、p-GSK3β蛋白水平明显低于ND组,Hck蛋白表达显著高于ND组;2.相比于对照组,在PA刺激的Hep G2细胞中p-AKT、p-GSK3β表达降低;Hck的蛋白表达水平增高;糖异生明显增加;3.Hck-si RNA质粒转染后明显降低了Hep G2细胞内Hck的蛋白表达水平,并逆转了PA刺激后引起的IR(p-AKT、p-GSK3β水平显著增加,糖异生得到抑制);4.相比于ND组,HFD组的ERK、核因子κB抑制蛋白(Inhibitor ofκB,IκB)及p-P65的磷酸化水平显著增高;PA刺激后,Hep G2细胞内ERK及NF-κB(p-IκB、p-P65)蛋白水平显著增高,炎症因子TNF-α,IL-6的水平升高;5.Hck敲低后,PA刺激后的Hep G2细胞内ERK及NF-κB(p-IκB、p-P65)的表达降低,炎症因子TNF-α,IL-6的水平下降;加用ERK抑制剂U102后,Hck的蛋白水平无明显变化;进一步降低了ERK及NF-κB(p-IκB、p-P65)的蛋白水平以及进一步降低了炎症因子TNF-α,IL-6的表达。综上所述,Hck可通过ERK-NF-κB信号通路传导刺激炎症因子表达从而诱导肝脏IR的发生。结论:1.高脂喂养引起小鼠肝脏脂肪异位沉积,炎症反应增强,胰岛素抵抗,Hck表达增高;2.高浓度棕榈酸处理引起肝细胞脂肪蓄积,炎症反应增强,胰岛素抵抗,Hck表达增高。3.Hck可通过ERK-NF-κB信号通路,刺激炎症反应,增加脂肪蓄积,诱导高浓度脂肪酸引起的肝脏IR。