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第一部分 CRE-decoy ODN对吗啡依赖SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性升高的抑制作用 目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein, CREB）为靶点的CREB结合位点诱骗寡核苷酸（CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide, CRE-decoy ODN）对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性的影响。 方法:（1） 合成全硫代磷酸化ODN:CRE-decoy ODN:5’-TGACGTCA TGACGTCA TGACGTCA-3′; CRE mismatch ODN; 5’-TGTGGTCA TGTGGTCA TGTGGTCA-3’; nonsense palindromic ODN; 5’-CTAGCTAG CTAGCTAG CTAGCTAG-3’。顺式元件CRE序列TGACGTCA为回文结构,合成含CRE序列的硫代磷酸化修饰的单链寡核苷酸,可自身杂交形成发卡结构。阳离子脂类N-[1-（2,3-dioleoyloxy）propyl]-N,N,N-trimethylammonium methylsulfate （DOTAP）为转移介质。使用时分别按ODN:HBS=1:10（μg/μl）、DOTAP:HBS=1:2.3（μg/μl）将ODN与DOTAP稀释后,再按ODN:DOTAP=1:6（μg/μg）将两者混匀,于15～25℃放置10～15 min。（2） 细胞培养和实验分组:人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株在含0.1 mmol/L非必需氨基酸、10%胎牛血清及2 mmol/L L-谷氨酰胺的MEM培养液中,于37℃含5%CO2孵育箱中培养。细胞融合到约50%时,在培养液内加入终浓度为100 μmol/L的盐酸吗啡,作用48 h,随即加入终浓度为10 μmol/L的盐酸纳络酮,作用15 min。在加入吗啡前1 h,分别在培养液内加入DOTAP、ODN与DOTAP混合物。ODN终浓度为150 nmol/L。实验分为5组,即①非治疗组:包括生理盐水对照（C）、慢性吗啡作用（M）及吗啡+纳络酮（M+N）亚组;②CRE-decoy ODN治疗组:包括单独CRE-decoy ODN治疗、M+CRE-decoy ODN及M+N+CRE-decoy ODN亚组;③mismatch ODN治疗组:包括单独mismatch ODN治疗、M+mismatch ODN及M+N+mismatch ODN亚组;④nonsense ODN治疗组:括单独nonsense