表达EGF蛋白的转基因鸡的制作

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目前有许多人类的药用蛋白都是利用工业生物反应器来生产的,然而这种体系的建立需要大量的人力、物力、财力且耗时较长。随着人们对药用蛋白的需求日益增长,研制一种即经济又高效的生产药用蛋白的生物反应器成为当下研究的热点。随着生物制药行业的迅速发展,转基因输卵管生物反应器的研究正成为当下焦点。转基因鸡已成为一个新兴的产业,生物制药工业和科学研究领域具有突出的优点。逆转录病毒介导法是现如今研究转基因鸡的最成功的方法,但目前国内对这种技术掌握的还不是太好,并且用该种研究方法制作的转基因鸡有潜在的危险。本实验在实验室之前的基础上,以高效为原则,对转基因鸡的制作方法做适当的改进。首先合成了人表皮生长因子载体质粒,在OV启动子,转录后修饰等方面都做了改进。病毒的生产与以往相同,病毒的浓缩与滴度的测定都采用试剂盒的方法,可以减少超离心对病毒滴度的影响,最大程度的保证病毒的活性;采用绝对定量PCR的方法,在RNA水平上测定病毒的拷贝数得到的结果为7×107copies/ml,。在得到病毒后,用病毒感染鸡胚成纤维细胞,提蛋白做Westemblot发现细胞是可以表达hEGF蛋白的。病毒注射使用的拉针,我们用机器制作的。这样可以将针头做的平滑没有刺棱,从而降低对鸡胚的伤害。在鸡蛋开口方面我们都采用热溶胶、蛋壳膜等方法较好的提高了鸡蛋的孵化率,最终的孵化率可以达到43%。最后检测转基因个体方面我们设计PCR检测以及蛋白检测。PCR检测转基因效率可以达到46%。达到高效制备转基因鸡的目标。
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