论文部分内容阅读
药品和个人护理用品（Pharmaceuticals and personal care products, PPCPs）是一大类与人类关系密切，种类繁多，应用非常广泛并且备受关注的“新型”环境污染物。全球每年PPCPs的使用量巨大，在许多水环境中检测出这类物质的残留。许多PPCPs在低浓度下可能在非靶生物体内与相关功能大分子结合，进而产生不可预知的生理作用。本研究选取PPCPs中的典型药品布洛芬（Ibuprofen, IBU）和三氯生（Triclosan, TCS）作为研究对象，以黄颡鱼为实验生物，研究这两种典型PPCPs物质对黄颡鱼Ⅰ相代谢酶和抗氧化酶系统的影响。使用环境相关浓度水平的布洛芬对黄颡鱼进行水体暴露，结果表明，随着暴露时间的延长，APND、ERND、EROD和GST均表现出先诱导后抑制的作用。GST在暴露24h后，受到最大程度的诱导，CAT在168h被显著诱导。丙二醛（MDA）的含量在24h较对照组显著下降，72h其含量达到最高值。其中，ERND和MDA响应较为敏感且有一定的浓度-效应关系，适合作为布洛芬暴露的生物标记物。在TCS(0.5，5，50和500μg.L-1)暴露中，黄颡鱼APND在168h诱导程度最大。EROD酶活性总体受到显著性抑制，72h时最低浓度组(0.5μg.L-1)显著诱导。ERND总体呈现为诱导响应。抗氧化代谢酶GST、CAT和MDA含量呈现出不同的变化趋势。其中EROD和GST活性响应敏感且变化稳定，适合作为TCS暴露的生物标记物。黄颡鱼在IBU和TCS混合暴露条件下，APND和EROD的变化趋势类似，基本表现为先抑制后诱导再受到抑制。ERND在暴露24h后受到显著抑制，之后恢复到初始水平。GST在24h和168h受到抑制，72h无明显变化。CAT在暴露24h后就受到极显著性抑制，72h活性有所增加。MDA含量在72h达到最大值。其中EROD、CAT和MDA对两种物质的混合暴露响应较为敏感，有望成为敏感的生物标志物来监测水体中IBU和TCS这两种物质的污染。根据GenBank已登录的鱼类CYP3A cDNA序列，设计引物，采用RT-PCR和RACE法扩增获得黄颡鱼全长cDNA，长度为1737bp，编码区长1440bp，共编码479个氨基酸，该基因所推导出的氨基酸序列与其他物种CYP3A的氨基酸进行多序列比对，并构建系统进化树，发现其与鲤形目的鱼类聚为一枝。BLAST结果显示与稀有鮈鲫的同源性最高，达79%；与其他鱼类CYP3A的同源性较高，大于65%；与人、鸟类和褐家鼠等哺乳类动物的同源性略低，均为55%左右，依此构建的进化树与其分类关系吻合。初步推断，该基因为黄颡鱼CYP3A基因。根据已发表的鱼类GST cDNA序列设计引物，RT-PCR法扩增出585bp的核心片断，与其他鱼类的GST cDNA序列有较高的同源性，根据核心片段设计RACE引物，得到该基因全长1103bp，开放阅读框长672bp，共编码223个氨基酸。BLAST结果显示，所得序列与斑点叉尾鮰GST氨基酸同源性最高，达90%；与其他鱼类同源性大于60%。初步判断所克隆的基因为黄颡鱼GST基因。