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银杏内酯（Total Ginkgolides,TG）是银杏叶提取物（EGb）中的一类帖烯内酯成分，它主要包括单体内酯A、B、C、M、J和白果内酯。关于EGb的心脑血管药理作用已有许多研究报道，关于单体内酯B及白果内酯等的抗血小板活化因子（PAF）作用及神经保护作用也有一些报道。TG与EGb相比是相对纯的中药药用有效部位，与单体内酯A、B、白果内酯等相比，前者含量远高于各单体成分，易得且价廉，并且推测它可能会有各单体协同作用的优势，此外，抗脑缺血药及神经保护剂的开发研究是目前亟待解决的课题，鉴于此，本文以银杏内酯为研究对象，从整体到分子水平研究了其抗脑缺血作用及作用机理。 首先，研究了TG对小鼠密闭缺氧、急性脑缺血和大鼠局灶性脑缺血的保护作用。采用小鼠密闭缺氧实验，观察了TG对小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间，并用测氧仪测定了容器内的氧含量变化情况；将标准体重的雄性小鼠双侧颈总动脉及迷走神经共同结扎，造成脑缺血合并血压下降，观察了TG对小鼠死亡率及死亡时间的影响；将标准体重的雄性小鼠急性断头造成全脑缺血，观察了断头后瞬时小鼠的喘气时间变化情况；电凝雄性大鼠一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血（MCAO），观察了TG对大鼠行为障碍、脑梗塞面积、脑组织病理变化及脑水含量的影响。结果表明，各剂量TG对密闭容器内小鼠全身缺氧的耗氧量及死亡时间无明显保护作用；TG32mg·kg-1可显著降低结扎双侧颈总动脉及迷走神经后小鼠在120min内的死亡率，显著延长小鼠的存活时间；TG16和32mg·kg-1可显著延长急性断头后小鼠的喘气时间；TG8和16mg·kg-1可显著改善大鼠MCAO后6h的行为功能障碍，TG4,8和16mg·kg-1可显著改善大鼠MCAO后24h的行为功能障碍；TG4,8和16mg·kg-1可显著减少MCAO后大鼠的脑梗塞面积；MCAO后大鼠脑组织的病理学检查结果表明，TG各剂量组可不同程度地减轻大鼠缺血侧脑组织的神经元受损形态；TG8和16mg·kg-1可明显降低大鼠MCAO后的脑组织水含量。 然后，研究了TG对体外培养的大鼠胎鼠皮质神经细胞不同损伤模型的影响。用1mM谷氨酸（终浓度，以下所有浓度均指在培养液中的终浓度）和0.2mM H2O2分别与皮质神经细胞温育8h，造成培养的皮质神经细胞损伤；另向培养液中加入20nM KCN使细胞化学性缺氧并同时完全撤除培养液中的葡萄糖，造成细胞缺糖缺氧性损博士学位论文：银杏内酯抗脑缺血作用及其机制的研究 摘要伤，测定细胞培养液中的乳酸脱氢酶队DH)活性，并用MTT法测定细胞的可见性，观察TG对H种细胞损伤模型的保护作用。结果表明，在谷氨酸损伤模型上，TG各剂量在谷氨酸损伤处理的同时加入培养液中，可明显增加细胞活力，TG10”‘和 10”’g·L’可明显降低LDH的释放JG在谷氨酸损伤之前预先与细胞温育12h，TG10’，10”‘和 10－’g·L－’可明显增加细胞活力，TG 10’g·L”’可明显降低 LDH的释放。在 HZOZ损伤模型上，TG与 HZOZ同时给细胞温育 12 h，所有剂量均未见其对细胞损伤的保护作用，而大剂量TG门－’和10‘’g·L－’)预给细胞孵育12h后再用H。O；损伤处理，可见其明显地增加细胞活力并降低 LDH释放。TG各剂量预处理细胞 12 h后，再进行缺糖缺氧性损伤，未见TG有保护作用。 随后，研究了TG对栓线法致局灶性脑缺血大鼠脑组织内自由基防御系统的影响。实验采用可逆的大脑中动脉阻断模型，造成大鼠局灶性脑缺血 2 h再灌注 24 h，观察TG对大鼠脑缺血后 6 h和 24 h的行为障碍和缺血侧及对照侧大脑皮质、海马及纹状体组织核团的重量变化。测定了缺血再灌注后大鼠外周血清中乳酸脱氢酶儿DH和肌酸激酶厂以的活性：测定了大鼠缺血再灌注后缺血侧及对照侧大脑皮质的过氧化氢酶KAT卜谷脱甘肽过氧化物酶（GSPX）的活性及还原型谷脱甘肽（GSH的含量：测定了大鼠缺血再灌注后皮质、海马及纹状体的超氧化物歧化酶瞩OD）的活性和脂质过氧化物丙二醛（MDA）的含量。结果表明，在缺血 6 h，TG 8 mg上g－’可显著改善大鼠的行为功能障碍；在缺血 24 h，TG 8和 16 mg·kg‘可显著改善大鼠的行为功能障碍；TG16 mg·kg－‘可显著减少缺血侧海马脑区的水肿，而各组对照侧海马和纹状体无明显水肿发生。TG mg·kg”‘可明显降低外周血清中的 LDH活性，对 CK活性也有降低的作用趋势；TG 16 mg屿－‘可显著增加缺血侧皮质的 CAT活性，TG 4，8和 16 mg·kg”‘三个剂量均可明显降低缺血侧皮质的GSHPX活性：各组对照侧皮质的CAT和GSHPx活性均无显著差异。TG 8和 16 mg·kg”’可明显增加缺血侧纹状体内的SOD活性，对缺血侧皮质和海马脑区的SOD活性无显著影响；各组对照侧皮质、海马及纹状体内的SOD活性无显著差异。TG各剂量有增加缺血侧皮质内GSH含量的作用趋势，TG 8和 16 mg·kg“’可明显降低缺血侧皮质内的 MDA含量，同时 TG mg·kg－’可明显降低缺血侧纹状体内的MDA含量，但对缺血侧海马脑区的MDA含量无明显影晌。对照侧皮质的GSH和对照侧皮质、海马及纹状体内的Nil3A含量各组均无显著差异。 最后