橄榄叶多酚提取纯化及抗氧化活性的研究

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橄榄为橄榄属青橄榄树(Canarium album L.),是我国珍贵的药用资源,也是福建省福州市重要的特产资源。本项目对橄榄叶中的酚类化合物进行提取、分离和纯化,研究橄榄叶多酚的抗氧化活性并通过高效液相色谱法分析了橄榄叶多酚的组成成分。研究成果为进一步开发橄榄叶多酚的利用提供理论依据。(1)研究了乙醇浓度、浸提温度、料液比、浸提时间、浸提次数五个因素对橄榄叶多酚提取率的影响。在单因素的试验基础上,应用Box-Benhnken中心组合方法进行3因素3水平试验,以多酚提取率为响应值,进行响应面分析。结果表明,橄榄叶多酚提取的最佳工艺条件为:料液比1:25、提取温度72℃、浸提时间2.4h、乙醇浓度为50%(v/v)。在此条件下,溶剂法提取橄榄叶多酚的提取率为14.7%。(2)采用微波提取技术,研究橄榄叶多酚的微波辅助提取工艺。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,选取乙醇浓度、微波时间和料液比3个因素的3个水平进行响应面分析,建立橄榄叶多酚提取率的二次回归方程,得到提取工艺的优化组合条件。试验结果表明,橄榄叶多酚提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度63%、微波时间30s、料液比1:25、微波功率为240W。在此最佳条件下,橄榄叶多酚的提取率为16.15%,比单一采用乙醇提取法提高了9.86%。(3)采用大孔树脂吸附法对橄榄叶多酚提取物进行纯化研究。通过静态吸附和解吸试验,从6种树脂中优选出HP-20树脂为分离纯化橄榄叶多酚的最优材料,并确立橄榄叶多酚纯化工艺参数。橄榄叶多酚粗提物柱层析最佳纯化条件为:上样溶液浓度4mg/mL、pH4、上样速率3BV/h;最佳洗脱条件为:乙醇浓度50%(v/v)、洗脱速率3BV/h。在此条件进行纯化,橄榄叶多酚最终纯度达71.2%,取得较理想的效果。(4)以茶多酚和Vc为对照,采用Fenton反应和邻苯三酚自氧化法研究橄榄叶多酚对OH和对O2-的清除作用。结果显示:在一定浓度范围内,橄榄叶多酚对OH和O2-具有一定的清除能力;橄榄叶多酚对OH和O2-的清除能力总体弱于Vc;但在浓度较低时,橄榄叶多酚对于超氧阴离子的清除能力比同浓度Vc高。橄榄叶酚类物质总抗氧化能力研究显示:橄榄叶酚类物质具有较强的总抗氧化能力。(5)采用反相高效液相色谱法对橄榄叶多酚类化合物的化学成分进行了研究。色谱条件为:利用C18色谱柱,选择流动相为甲醇-水-醋酸梯度洗脱,检测波长为280nm,柱温为35℃,流速1mL/min,分析橄榄叶多酚的主要成分并从中分离出没食子酸。
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