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本论文分三个部分,第一部分为绪论。通过查阅文献讨论当前巨龙竹速生与巨大的可能机制,包括生长素代谢及信号传导对植物生长的影响、蔗糖代谢途径对植物生长的影响以及其他影响生长的基因,并展望了植物速生与巨大机理研究趋势。
第二部分为巨龙竹cDNA文库构建。用巨龙竹当年所发新叶提取总RNA,所用试剂盒为植物叶RNA抽提试剂盒;采用Creator SMART cDNA Library constructionkit所提供的方法,合成及纯化cDNA,并将cDNA连接到质粒载体上,通过CaCl<,2>法将重组质粒转化到DH5a中,成功构建了巨龙竹cDNA文库。文库容量为1.04*10<5>efu/ml,PCR检测表明大多数插入片段均大于1000bp,表明构建的巨龙竹eDNA文库质量较高,为进一步进行EST测序和全长基因克隆打下了基础。
第三部分为目的基因克隆与表达。通过对文献分析,确定一系列的目的基因。分别采用了PCR 筛选文库、RACE方法及文库直接测序三种方法克隆目的基因。获得了六条与生长相关表达序列标签(SUS、SPS、UGT、EXP、SPY、SINA);八条与叶绿素及核糖体相关的表达序列标签;两条全基因序列(UGP,elF5A).UGP被连接到pBI121表达载体上,得到表达质粒pBI-u14,并将elF5A连接到pBin19表达载体和pET32表达载体,得到表达质粒pBin38和pET38。这些表达载体可能被转入到表达宿主中,如拟南芥。为进一步研究UGP的功能和探讨与巨龙竹速生巨大的关系奠定了基础。