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背景神经管缺陷是一组先天性中枢神经系统畸形,无脑儿是其中最严重的一个类型。miRNAs通过转录后调控靶基因参与各种生物学过程,它对哺乳动物中枢神经系统的发育分化具有重要作用。但是miRNAs在神经管缺陷中的功能尚不清楚。目的通过miRNA微阵列探索无脑儿脑组织中存在的miRNA表达谱；分析筛选出的异常表达miRNAs并进行功能分析,寻找可能与神经管缺陷相关的基因通路；寻找可能参与神经管缺陷发生的候选基因。方法收集无脑儿脑组织标本5例和正常引产儿脑组织5对作对照,提取总RNA,通过miRNA微阵列芯片分析miRNAs表达谱,找出显著性差异表达的miRNAs,并采用qRT-PCR进行验证；通过四个靶基因预测程序联合的方法,寻找显著性差异表达的miRNAs靶基因；在MAS3.0(Molecule Annotation System3.0)系统中分析靶基因分子生物学功能及作用通路。结果通过微阵列芯片分析发现,与对照组相比,在无脑儿脑组织中发现70个miRNAs上调表达(ratio≥2),7个miRNAs下调表达(ratio≤0.5)；通过qRT-PCR验证10个差异表达miRNAs发现,在无脑儿中miR-22, miR-23a, miR-34a, miR-103, miR-125a, miR-132, miR-134, miR-138和miR-185显著地表达上调,miR-149显著地表达下调,结果与微阵列分析结果基本一致；针对10个验证过的miRNAs,发现了存在459个潜在靶基因；通过MAS3.0对459个靶基因生物功能分析发现,有119个miRNAs直接参与到基因表达调控通路,涉及到22个分子注释和55个基因功能通路,以及发现了6个与先天性脑结构发育异常相关的候选基因(HNRPU, JAG1, FMR1, EGR3, RUNX1T1, and NDEL1)。结论1、在无脑儿脑组织中存在异常miRNAs表达谱；2、miRNAs主要通过MAPK信号途径在人类无脑儿发病机理中发挥调控作用；3、6个神经管缺陷相关基因可能与神经管发育闭合存在至关重要的作用。目的探索维甲酸(retinoic acid, RA)体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化的方法,以及分化相关因子在诱导分化过程中的表达。方法小鼠P19胚胎癌细胞被RA(终浓度1×10-6M)诱导4d后,以单细胞在无血清培养液中贴壁生长、分化7d。通过免疫荧光法鉴定细胞分化,实时定量PCR和Western blot方法检测分化相关指标SOX2、NESTIN、TUJ1、Neurod2的表达。结果分化7d后,在RA组观察到丰富的TUJl的表达；对照组极少观察到TUJ1表达。在RA存在条件下,SOX2的呈波动高表达,对照组持续递减表达；NESTIN呈现迅猛上升,在诱导第4d时明显高于对照组,分化期间两组无显著性差异；Neurod2在诱导第2d有小量表达,迅速升高至分化第1d出现峰值,TUJl与Neurod2的表达呈正相关,并在Neurod2表达条件下持续升高；对照组中Neurod2和TUJl显著性低表达。结论RA体外诱导P19胚胎癌细胞向神经元样细胞分化可作为研究人类神经系统发育的体外模型；Neurod2可能促进神经前体细胞向神经元的分化和维持神经功能活性。