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[目的]:
本研究通过对喉癌患者血液和肿瘤组织穿通支原体、肺炎支原体和发酵支原体的检测,阳性并经nPCR和DNA序列分析验证。并对穿通支原体感染阳性和阴性人群血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量和肿瘤组织中NF-κB的表达予以检测,试图探讨穿通支原体在喉癌中的感染率。旨在为喉癌发生、发展的生物学因素提供新的依据,为喉癌的早期诊断和防治提供一种新的途径。
[方法]:
取自本院2006年至2007年93例喉癌患者血液和肿瘤组织,采用SP-4分离培养检出支原体,并经nPCR和DNA序列分析验证为穿通支原体的同时采用电镜技术观察肿瘤组织中的支原体颗粒,同时采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测穿通支原体阳性和阴性喉癌患者血清中TNF-α含量,免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB的表达,以上并与20例正常体检人群人血液以及20例声带息肉相对照。
[结果]:
1.93例喉癌患者中,穿通支原体感染阳性25例(33株穿通支原体),采用x2检验,分别与息肉患者组织(0.0%,0/20)以及正常人血液(0.0%,0/20)比较,组间差异显著(p=0.022;p=0.043)。提示喉癌患者穿通支原体感染率明显高于非肿瘤组。
2.64例中、低分化患者中合计22例分离到穿通支原体(34.38%,22/64),与高分化组(10.34%,3/29)相比较,采用x2检验,计算,差异在统计学上有显著意义(x2=6.70,p<0.05)。提示低分化、中分化组喉癌患者的穿通支原体感染率显著高于高分化组患者。
3.41.18%(14/34)有淋巴结转移的喉癌患者穿通支原体检出阳性,而59例无淋巴结转移的喉癌患者穿通支原体检出仅为18.64%(11/59)。采用x2检验,计算,差异显著(x2=5.5716,p<0.05)。提示有淋巴结转移的喉癌患者穿通支原体感染率明显高于无淋巴结转移的喉癌患者(p<0.05)。
4.喉癌患者的血清TNF-α含量平均浓度为(65.61±26.83pg/ml),高于正常人血清TNF-α含量平均浓度(20.45±4.32pg/ml)。而穿通支原体感染阳性喉癌患者血清TNF-α含量(90.11±30.09pg/ml)更高于非MPe感染组喉癌患者(56.59±18.93pg/ml)。提示MPe的感染促使血清TNF-α浓度的升高。
5.喉癌组织的NF-κBp65的表达率为91.39%(85/93),声带息肉组织的NF-κBp65的表达率为5.00%(1/20)。提示喉癌组织NF-κBp65表达显著上升。
6.穿通支原感染阳性的喉癌患者肿瘤组织的NF-κBp65的表达程度显著高于穿通支原检出阴性的喉癌患者。喉癌患者血清TNF-α含量以及喉癌组织的NF-κBp65的表达程度与穿通支原体感染成正相关。
7.经分离培养、nPCR证实为穿通支原体感染的喉癌组织标本在电镜下观察见到带钩状的三层膜结构MPe颗粒。
[结论]:
1.穿通支原体感染与喉癌的发生、发展、转移有关。喉癌患者的穿通支原体感染率显著高于声带息肉患者和正常人;低、中分化喉鳞癌患者的穿通支原体感染率显著高于高分化喉鳞癌患者;有淋巴结转移的喉癌患者的穿通支原体感染率显著高于无淋巴结转移的喉癌患者。
2.穿通支原体能刺激机体分泌TNF-α。喉癌患者的血清TNF-α含量显著高于正常人,穿通支原体感染阳性的喉癌患者的血清TNF-α含量显著高于无穿通支原体感染的喉癌患者。
3.穿通支原体能激活NF-κB。穿通支原感染阳性的喉癌患者肿瘤组织的NF-κBp65的表达程度显著高于穿通支原感染阴性的喉癌患者。
4.经分离培养、nPCR证实为穿通支原体感染的喉癌组织标本在电镜下观察,见到带钩状的三层膜结构MPe颗粒,电镜下观察到的Mpe存在的同时见肿瘤细胞的充分溶解,细胞膜消失。