山梨酸与苯甲酸氨基酸酯衍生物的合成及抑菌活性研究

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山梨酸具有较强的抑菌活性,但由于长期的使用,已有越来越多的微生物开始对山梨酸产生抗性。并且,山梨酸一般只适用于酸性体系中,而在中性体系和碱性体系中,几乎没有任何抑菌活性。为此,寻找具有广谱、高效、低毒的新型抗菌剂成了食品领域的一个研究热点。本论文以山梨酸、苯甲酸、甘氨酸、苯丙氨酸、甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇为原料,合成一系列山梨酸的氨基酸酯衍生物(SAAD,a1~a7)和苯甲酸的氨基酸酯衍生物(BAAD,b1~b6),并期望筛选出活性更高的新型抗菌剂。(1)以氨基酸、醇和氯化亚砜为原料反应合成氨基酸酯盐酸盐,并通过正交实验研究了反应时间、反应温度和物料配比对氨基酸酯盐酸盐收率的影响。在反应时间3.5h,反应温度60℃,氨基酸与氯化亚砜物料摩尔比1:3.2的最佳工艺条件下,所有氨基酸酯盐酸盐的收率都达到了90%将以上。(2)以酰氯法合成山梨酸甘氨酸乙酯(a1)、山梨酸甘氨酸丙酯(a2)、山梨酸甘氨酸异丙酯(a3)、山梨酸苯丙氨酸甲酯(a4)、山梨酸苯丙氨酸乙酯(a5)、山梨酸苯丙氨酸丙酯(a6)和山梨酸苯丙氨酸异丙酯(a7)等七种山梨酸的氨基酸酯衍生物;合成苯甲酸甘氨酸乙酯(b1)、苯甲酸甘氨酸丙酯(b2)、苯甲酸甘氨酸异丙酯(b3)、苯甲酸苯丙氨酸甲酯(b4)、苯甲酸苯丙氨酸乙酯(b5)和苯甲酸苯丙氨酸异丙酯(b6)等六种苯甲酸的氨基酸酯衍生物。(3)通过碱洗、萃取、薄层色谱和柱层析等方法对合成产物进行分离纯化,并通过熔点测定、核磁共振氢谱和质谱等方法分析纯化物质的表征,结果表明其分子结构与理论值一致。(4)采用平板涂布法研究了合成物质的最低抑菌浓度,结果表明,SAAD的抑菌活性较强,而BAAD的抑菌活性并不明显。其中, a7对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、牛奶酸败混合菌、酿酒酵母和黑曲霉的最低抑菌浓度分别为0.17mM,0.50mM,1.66mM,1.66mM,1.33mM和3.98mM,其抑菌效果要远远优于山梨酸和苯甲酸的抑菌效果。并且,对于pH5.0,pH7.0,和pH9.0三种不同体系,a7都可以有效抑制牛奶酸败混合菌的生长,在72h时的抑菌率分别为92.2%、94.9%和93.6%。(5)将a2、a5和a7三种化合物分别配制成浓度为5g/L的溶液,对人体皮肤进行涂擦后,不会产生致敏性。(6)以MTT法研究了a2、a5和a7对LO2正常肝细胞存活率的影响,结果表明,当浓度高于500μmol/L时,药物对细胞存活率的影响较大;当药物浓度低于或等于250μmol/L时,细胞存活率可达80%以上。且其细胞毒性与山梨酸的细胞毒性相当,四者的细胞存活率不存在显著性差异。
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