论文部分内容阅读
目的: 探讨苍术素(Atractylodin)抑制人胃癌MKN-45细胞增殖的作用及其作用机制，为研发新型抗肿瘤药物提供实验依据和理论基础。 方法: 1.倒置显微镜观察苍术素对MKN-45细胞形态的影响;MTT法测定苍术素诱导MKN-45细胞半数致死的药物浓度和时间。 2.荧光显微镜结合Hoechst33258/PI染色观察苍术素对MKN-45细胞凋亡形态的影响。 3.流式细胞仪结合PI染色和Annexin V/PI染色检测苍术素对MKN-45细胞的细胞周期的影响及细胞凋亡率。 4.Western blot法检测经苍术素处理后MKN-45细胞相关凋亡蛋白表达的变化。 5.液相芯片法检测苍术素对MKN-45细胞分泌相关细胞因子的影响。 结果: 1.不同浓度苍术素作用于MKN-45细胞后，浓度在5mg/L和10mg/L时促进细胞增殖;浓度大于20mg/L时，抑制细胞增殖，且抑制作用呈时间和浓度依赖性。 2.光镜和荧光显微镜下可见经浓度大于20mg/L的苍术素处理12h后的细胞出现细胞凋亡的形态学特征。 3.流式细胞仪结果可见MKN-45细胞的细胞周期停滞在G1期，凋亡细胞数量随时间和浓度的增加而增多。 4.Western blot结果显示经苍术素处理后，MKN-45细胞的PARP-1的表达量明显增高，AIF被激活;caspase3、caspase8和caspase9未被激活，caspase3和caspase9前体蛋白表达量不变。 5.液相芯片结果表明，苍术素抑制MKN-45细胞分泌IL-6、TNF-α、IL-10和IL-12p70，诱导细胞分泌IL-7和IL-1β。 结论: 本研究结果显示，苍术素抑制MKN-45细胞增殖，且抑制作用呈时间和浓度依赖性。苍术素通过阻断细胞周期、使细胞周期停滞在G1期，经由非依赖caspase的PARP-1/AIF信号通路诱导细胞凋亡和影响细胞相关细胞因子的分泌来抑制MKN-45细胞的增殖。