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目的: 复方伯氨喹片为青蒿研究中心自行研制的新型抗疟药,其两个有效成分为青蒿素(Artemisinin,ART)、磷酸伯氨喹(primaquine phosphate,PMQ)。中国药典2010版对青蒿素原料的含量测定方法作了修改,由前版的UV法改为HPLC法,而磷酸伯氨喹原料的含量测定方法未作修改,原料的含量测定方法为电位滴定法,其制剂磷酸伯氨喹片的含量测定方法为永停法。通过查阅文献发现青蒿素含量测定方法的研究报道很多,UV法、HPLC法等测定方法已趋于成熟,而磷酸伯氨喹含量测定方法的研究相对少很多,目前还没有复方伯氨喹片含量测定方法的相关报道。 本文旨在建立专属性强、准确、简便的分析方法,采用UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中青蒿素的含量测定方法,采用永停法、UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中磷酸伯氨喹的含量测定方法,为复方伯氨喹片质量标准中含量测定方法的建立提供理论依据。 方法: 青蒿素的UV法含量测定用外标法,以吸收值对ART进行定量分析。乙醇与0.2%NaOH溶液混合后加热开环,291nm波长处测定。 青蒿素的HPLC法含量测定用外标法,以峰面积对ART进行定量分析。理论板数按青蒿素峰计算不低于3000。 色谱条件色谱柱:Diamonsil ODS250×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-水(68:32)为流动相;流速:0.8mL·min-1;检测波长:216nm;柱温:25℃;进样量:20μL。 磷酸伯氨喹的永停法含量测定用滴定度,以本液的消耗量与对氨基苯磺酸的取用量进行定量分析。亚硝酸钠滴定液的配制与标定。 磷酸伯氨喹的UV法含量测定用外标法,以吸收值对PMQ进行定量分析。0.01mol·L-1盐酸溶液,264nm波长处测定。 磷酸伯氨喹的HPLC法含量测定用外标法,以峰面积对PMQ进行定量分析。理论板数按磷酸伯氨喹峰计算不低于3000。 色谱条件色谱柱:Diamonsil ODS250×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.25%二乙胺溶液(PH4.0)(30:70)为流动相;流速:0.8mL·min-1;检测波长:263nm;柱温:25℃;进样量:20μL。 结果: 青蒿素的UV法含量测定方法准确度高,平均回收率为102.1%,RSD为1.23%(n=9);精密度好,平均含量为100.5%,RSD=1.36%(n=9);ART在2.4~12μg·mL-1的范围内,吸光度与浓度间呈现良好的线性,线性方程为Y=16.4436X-0.08059,r=0.9999(n=6);供试品溶液在分析浓度下,24小时内基本稳定。 青蒿素的HPLC法含量测定方法准确度高,平均回收率为99.8%,RSD为1.12%(n=9);精密度好,平均含量为100.5%,RSD=1.16%(n=9);ART在8~40μg的范围内,峰面积与浓度间呈现良好的线性,线性方程为Y=39086.6X-3002.79,r=0.9999(n=5);LOQ为0.48μg(S/N=10);供试品溶液在分析浓度下,24小时内基本稳定。 磷酸伯氨喹的永停法含量测定方法准确度高,平均回收率为100.5%,RSD为0.18%(n=9);精密度好,平均含量为103.1%,RSD=0.36%(n=9);PMQ在0.1~0.5g的范围内,消耗滴定液体积与称样质量间呈现良好的线性,线性方程为Y=44.829X+0.1028,r=0.9999(n=6)。 磷酸伯氨喹的UV法含量测定方法准确度高,平均回收率为102.0%,RSD为1.20%(n=9);精密度好,平均含量为97.8%,RSD=1.40%(n=9);PMQ在4.8~24μg·mL-1的范围内,吸光度与浓度间呈现良好的线性,线性方程为Y=27.9934X-0.14309,r=0.9998(n=6);供试品溶液在分析浓度下,24小时内基本稳定。 磷酸伯氨喹的HPLC法含量测定方法准确度高,平均回收率为99.9%,RSD为1.31%(n=9);精密度好,平均含量为101.0%,RSD=0.46%(n=9);PMQ在0.032~1.12μg的范围内,峰面积与浓度间呈现良好的线性,线性方程为Y=3355420X-20691,r=0.9999(n=6);LOQ为3×10-3μg(S/N=10);供试品溶液在分析浓度下,24小时内基本稳定。 结论: 本文首次采用UV法、HPLC法测定复方伯氨喹片中的青蒿素含量,以及采用永停法、UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中的磷酸伯氨喹含量,最终确立用HPLC法测定复方伯氨喹片中的青蒿素和磷酸伯氨喹含量。方法专属性强、精密度好、准确度高、测定条件下线性好、灵敏度高、供试品溶液稳定,方法快速简便,适于复方制剂定量测定。所建立方法可作为建立质量标准方法的依据。