目的:RUNX3是新近发现的肿瘤抑制基因，它在多种脏器特别是胃肠道的恶性肿瘤发生中有重要的作用。本研究通过检测RUNX3基因在结肠癌中的表达，分析其在结肠癌中的功能状态及其与结肠癌临床病理参数的关系，明确RUNX3基因在结肠癌发生、发展中的作用；通过稳定转染RUNX3，研究在结肠癌中RUNX3如何通过TGF-β信号通路发挥作用。　　 方法:　　 1、应用免疫组化方法检测RUNX3蛋白在98例结肠癌组织中的表达情况。分析RUNX3基因表达与结肠癌临床病理参数间的相关性，明确RUNX3基因在结肠癌发生、发展中的作用；分析TGF-β信号通路上RUNX3与Smad4，Bim表达的相关性，探讨RUNX3基因在TGF-β信号通路上与其它因子的相关性。　　 2、应用RT-PCR及Western Blot方法检测49例新鲜的结肠癌组织及相应的癌旁正常组织中RUNX3基因的mRNA及蛋白表达水平，分析RUNX3基因在mRNA和蛋白水平表达的差异；应用MSP方法研究RUNX3基因在人结肠癌中启动子甲基化状态，分析RUNX3启动子区甲基化与临床病理参数的关系，探讨RUNX3表达缺失的原因。　　 3、稳定转染RUNX3基因到结肠癌细胞系HT-29，应用MTT、流式细胞术等检测稳定转染RUNX3基因对结肠癌细胞动力学的影响，明确RUNX3对结肠癌细胞生长、增殖的影响。　　 4、TGF-β作用于稳定转染的HT-29细胞系，应用MTT、流式细胞术、Tunel等检测TGF-β作用前后结肠癌细胞生长、增殖、凋亡，应用Western Blot法检测TGF-β作用前后TGF-β信号通路上RUNX3，磷酸化的Smad2/3，Smad4，Bim的表达变化，分析RUNX3在TGF-β信号通路中发挥作用的机制。　　 结果:　　 1、结肠癌组织中RUNX3的表达明显低于癌旁正常粘膜组织，差别有统计学意义。RUNX3蛋白表达与结肠癌高-中、低分化程度，腺癌和粘液癌，淋巴结转移相关，而与病人的年龄、肿瘤大小等无关。RUNX3在结肠癌中可以异位表达在细胞核周围。　　 2、结肠癌中RUNX3与Bcl-2蛋白的表达呈负相关，与Bim、Bax的表达呈现正相关；RUNX3与Smad4蛋白的表达呈正相关，与Smad7的表达呈负相关。　　 3、结肠癌组织中RUNX3 mRNA和蛋白的表达明显低于癌旁正常组织，且与分化程度、组织学类型、淋巴结转移相关。RUNX3基因启动子区域的甲基化与淋巴结转移和肿瘤分化程度相关。　　 4、稳定转染RUNX3基因的结肠癌细胞系HT-29/RUNX3，细胞的生长受到明显的抑制，G0/G1期细胞比例明显升高，S期细胞比例下降，细胞阻滞于G0/G1期，凋亡率增高。Bim蛋白表达稍增高。　　 5、TGF-β作用于HT-29/RUNX3细胞后，细胞生长更为减慢，凋亡率更为升高，Smad4、Bim蛋白表达增加。　　 结论:　　 1、RUNX3 mRNA和蛋白在结肠癌组织中表达明显低于癌旁正常粘膜组织，而且mRNA和蛋白的表达相关。表明RUNX3基因在结肠癌的发生中表达减少或缺失，RUNX3基因可能作为一个抑癌基因参与结肠癌的发生。RUNX3基因启动子区域高甲基化状态是导致该基因表达缺失的主要原因。　　 2、RUNX3蛋白表达与结肠癌分化程度、组织学类型、淋巴结转移相关，即随着结肠癌的分化程度降低，淋巴结出现癌转移，RUNX3的阳性表达率下降。RUNX3在结肠癌中的表达对评价患者的预后有一定价值。　　 3、在部分结肠癌组织中，RUNX3蛋白可异位表达在细胞核周围，未进入到细胞核内发挥作用。　　 4、结肠癌中RUNX3与Bim、Bax蛋白的表达呈正相关性，与Bcl-2表达呈现负相关。RUNX3与Smad4蛋白的表达呈正相关性，与Smad7蛋白的表达呈负相关性。RUNX3基因发挥抑癌作用的机制与TGF-β信号通路调节细胞周期和调控细胞凋亡有关。　　 5、成功建立了高表达RUNX3基因的结肠癌细胞系HT-29/RUNX3。RUNX3基因高表达使细胞阻滞于G0/G1期，生长速度减慢，凋亡增加，RUNX3作为抑癌基因发挥重要作用。　　 6、稳定转染RUNX3的HT-29/RUNX3细胞系，TGF-β信号通路可以部分恢复，Smad4、Bim蛋白表达增加及凋亡率大幅增加，可能是通过RUNX3-Bim途径和TGF-β-RUNX3-Smad4/Bim两条途径发挥作用。