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心肌肥厚是心血管疾病常见的临床症状,它与冠心病、心衰、脑卒中等心血管疾病均密切相关,其发生机制目前仍不十分清楚。近年来疾病相关基因的分离已成为揭示其发病机制的重要研究内容,而分离心肌肥厚相关基因也将对我们了解其发生的分子机制及其预防和治疗提供有益的线索。 在本课题组以往的研究中,使用了cDNA差减杂交法分离了大鼠压力负荷型心肌肥厚相关的基因片段,经斑点杂交、菌落原位杂交验证后共筛出了36个片段在正常与模型组之间表达存在明显差异。序列同源性比较表明其中一些类似与已知基因细胞色素b、线粒体肌酸激酶、rabllb等。本实验正是在这个基础上,根据表达差异片段的序列信息设计引物,利用SMART RACE法经5’、3’RACE反应及序列拼接后,最终得到包括了起始密码、终止密码在内的具有完整阅读框架的细胞色素b(1172bp)、线粒体肌酸激酶(1479bp)全长cDNA序列,将其克隆至PGEM—T载体上并测序鉴定全长序列。Northern印迹杂交分析也证实这两个基因在正常组与模型组之间表达存在明显差异。细胞色素b、线粒体肌酸激酶都是参与心肌细胞能量代谢的重要物质,它们在心肌肥厚发生早期(绑扎后3天)表达增加能够在一定程度上弥补由于负荷增大所引起的能量代谢加强的需要,从而起到了一定的功能代偿作用。 本文还应用cDNA芯片这项研究基因表达谱差异的新兴技术来筛选腹主动脉绑扎后4周大鼠的压力负荷型心肌肥厚相关基因。先将18000个cDNA点在带正电荷的尼龙膜上,以质粒DNA作为阴性对照证实杂交的