螺旋毛壳ND35抗生素的分离提取、部分理化特性及其生物活性测定

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子囊菌毛壳(Chaetomium spp.)在自然界广泛分布,是土壤和含纤维素的各种基物上常见的霉腐菌成员,某些种是许多植物病原真菌的潜在拮抗菌。从健康毛白杨上分离的内生菌优势种螺旋毛壳(Chaetomium spirale) ND35是一株广谱拮抗性生防因子,在离体试验中表现出对常见的林果病原菌,如苹果树腐烂病菌(Valsa mali)、杨树腐烂病菌(V. sordida)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的强烈抑制作用,其主要作用机制之一就是产生抗生素。为了阐明菌株ND35抗生素在植物病害生物防治中的作用机制,本文主要针对内生菌螺旋毛壳(C. spirale)ND35抗生素的分离提取纯化,抑菌谱测定,抗生素的稳定性,抗生素的安全性评价,对玉米弯孢叶斑病、菜豆灰霉病和板栗疫病的防治保护作用,对菜豆灰霉病的诱导抗病性,并通过碳源和氮源调控优化了培养发酵条件等方面进行了研究,阐明螺旋毛壳ND35抗生素在室内和温室中对植物真菌病害的抑制作用,为将来该抗生素在植病生防作用中的进一步推广使用奠定了基础。具体内容与结果如下:1.螺旋毛壳ND35抗生素的分离提取,抗生素粗提液和活性组分的生物测定。室内生测试验结果显示,该抗生素抑菌谱较广,其粗提液对杨树腐烂病等20多种病原菌具有很强的抑制作用;并通过TLC和HPLC进一步纯化出了该抗生素的4个组分,其中重点对3,4号组分进行了活性检测;2.该抗生素经121℃和100℃高温处理后,活性基本没有变化,抑菌率分别为66.3%和65.7%,相对对照的65.56%基本无变化,说明该物质的热稳定性很强;酸碱稳定性试验说明该物质在酸性条件下是很稳定的,而碱性条件下稳定性很差。3.室内和温室生防试验检测了抗生素对板栗疫病、玉米弯孢霉叶斑病和菜豆灰霉病具有很好的保护防治作用,浓度为400μg/mL的粗提液对玉米弯孢的防治效果为63.25%,对菜豆灰霉的防效是32.43%;浓度为1000μg/mL的粗提液对板栗疫病的防效可达46.29%;同时该抗生素能诱导菜豆产生抗病作用,用400μg/mL的粗提液灌根处理后,其叶片可获得诱导抗病性,其防效可达71.39%。4.通过对不同培养基的筛选,确定了PDB培养基是产生抗生素的最适培养基;碳源和氮源调控,确定了蔗糖是产生抗生素的最佳碳源;在此基础上优化了发酵培养基,为今后大量提取该抗生素提供了理论依据。5.安全性评价实验结果显示,抗生素对黄瓜、菜豆和玉米的生长有一定的促进作用,为以后抗生素的推广应用奠定了基础。
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