【摘 要】
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目的评估丹参酮ⅡA对大鼠胚胎心肌H9c2细胞向心肌细胞分化的影响,探讨丹参酮ⅡA在心肌再生中的作用及其相关机制。方法1、用不同浓度的丹参酮ⅡA(0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8、10、20 mg/L)处理H9c2细胞,4天后,MTS法检测细胞增殖情况,Western-blot法检测细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、
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目的评估丹参酮ⅡA对大鼠胚胎心肌H9c2细胞向心肌细胞分化的影响,探讨丹参酮ⅡA在心肌再生中的作用及其相关机制。方法1、用不同浓度的丹参酮ⅡA(0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8、10、20 mg/L)处理H9c2细胞,4天后,MTS法检测细胞增殖情况,Western-blot法检测细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)、细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)以及凋亡调控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表达情况,综合上述指标选择合适浓度的丹参酮ⅡA用于后续实验。2、用丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡA+β-catenin激动剂WAY-262611处理H9c2细胞7天,对照组不加药物,进行以下相关检测∶(1)Western-blot法检测经典Wnt信号通路相关蛋白(GSK-3β、APC、β-catenin)和非经典Wnt信号通路相关蛋白(Wnt11、Wnt5a)的表达情况;(2)Western-blot法检测细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)和细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)的表达情况;(3)免疫组化法及Western-blot法检测心肌特征性蛋白心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达情况。结果1、当丹参酮ⅡA增大到0.4 mg/L时,H9c2细胞的增殖速度明显下降,至0.6 mg/L~2 mg/L时,细胞增殖速度虽然减慢,但保持在一个增殖平台期,选用此区间浓度中0.6 mg/L处理细胞,其细胞周期调节蛋白(CDK4、CDK6、CyclinD1)及细胞增殖相关抗原(Ki67、PCNA)的表达均明显减少(P<0.05),但凋亡调控蛋白(Cleaved Caspase-3)的表达没有明显变化(P>0.05),鉴于增殖平台期细胞增殖受到抑制但不伴随凋亡的变化,我们选用此区间0.6 mg/L的丹参酮ⅡA用于本研究。2、与对照组相比,用丹参酮ⅡA处理的H9c2细胞中cTnI和cTnT的表达明显增加(P<0.05),经典Wnt信号通路中GSK-3β和APC的表达明显增加(P<0.05),β-catenin表达明显减少(P<0.05),非经典Wnt信号通路中Wnt11和Wnt5a的表达均明显增加(P<0.05)。3、与丹参酮ⅡA处理组相比较,丹参酮ⅡA+β-catenin激动剂WAY-262611处理组细胞中β-catenin表达明显增加(P<0.05),且CDK4、CDK6、CyclinD1、Ki67和PCNA表达明显增加(P<0.05),而cTnI和cTnT表达明显减少(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA能够促进H9c2细胞分化为心肌细胞,其机制与其能够调控Wnt信号通路有关;丹参酮ⅡA治疗缺血性心脏病在一定程度上与其能够促进CPCs分化为心肌细胞再生心肌有关。
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