论文部分内容阅读
根际是土壤-植物生态系统物质交换的活跃界面,本研究从海南文昌及广西北海采集了9份红树林植物老鼠簕根际土壤样品,从培养及非培养水平分析样品中放线菌的多样性。用6种不同的培养基进行根际土壤放线菌的分离和初步鉴定,并用分子生物学手段,构建放线菌16SrRNA基因文库,分析根际放线菌的组成。根据红树林高含盐量和高碳/氮比的特点,测试了分离菌株的耐盐和固氮能力,同时对分离菌株进行了抗菌活性评价；对分离菌株中一株Actinoallomurus属的疑似新种进行了多相分类鉴定。以放线菌特异性引物构建的16SrRNA基因克隆文库共获得59属,其中文昌和北海样品分别有39和40个属水平的分类单元。两个地点都有的属20个,只在文昌样品出现的19个,只在北海样品出现的20个。在pH分别为5、7、9的燕麦培养基(OA5、OA7、OA9)、棉子糖组氨酸培养基(RH),1/10ATCC172及SM2六种分离培养基中,共分离获得295株放线菌,其中从OA7和OA9两种培养基上分离到的菌株最多,分别为115株和128株,其次是RH和SM2培养基,分别获得29株和20株,从1/10ATCC172培养基上仅分离获得3株,OA5上未分离到放线菌。经排重后的219株菌经过16SrRNA基因分析分别属于7个亚目(Glycomycineae、Micrococcineae、Micromonosporineae、Pseudonocardineae、 Propionibacterineae、Streptomycineae、Streptosporangineae中7个科二下的15个属,其中海南文昌和广西北海都分离到的有5个属,分别为Actinomadura、Actinomycetospora、 Microbispora、Micromonospora、和Streptomyces、只在文昌样品中出现的有5个属分别为Actinoallomurus、Actinopolymorpha、Cellulosimicrobium、Polymorphospora和Sphaerisporangium;只在北海样品中分离到的也是5个属,分别为Actinaurispora、 Actinoplanes、Glycomyces、Jishengella和Plantactinospora。比较培养与非培养水平获得的属类群,非培养水平获得的类群数量更多,与土壤理化参数的相关性更高。但有的分离类群未在文库类群中出现,如文昌样品中分离获得的Actinopolymorpha, Microbispora和北海样品中分离到的Glycomyces, Actinaurispora, Actinomycetospora, Jishengella四个属。229株分离菌株的耐盐度测试结果显示,有2株菌最大耐盐度达到15%,7株菌能在10%盐度上生长,40株菌能在6%盐度下生长,5株不能在无盐却能在3.3%或以上生长,151株能在3.3%以上生长,所有测试菌株在20%盐度下不生长。利用Ashby和Nfb培养基筛选到19株可能具有固氮活性的放线菌。以4种致病细菌和1株致病真菌为靶标菌对232株分离菌株进行了抗菌活性初筛和91株进行复筛检测,抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC51650)活性稳定的菌株有26株,占总测试菌株的11.21%；抗耐药金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus9551)活性稳定的菌株有10株,占总测试菌株的4.31%；抗铜绿假单胞菌(Pseudomonas eruginosa S001)活性稳定的菌株有12株,占总测试菌株的5.17%；抗白色念珠菌(Candida albicans ATCC10231)活性稳定的菌株18株,占总测试菌株的7.76%；没有检测到有抗产气克雷伯菌(KlebsiellaAerogenes S008)的菌株。菌株2614A723从海南文昌红树林老鼠筋根际土壤分离获得,与Actinoallomurus spadix NBRC10499T、Actinoallomurus purpureus TTN02-30T、Actinoallomurus luridusTT02-15T的序列相似性分别为98.35%、98.07%及97.86%,经多相分类鉴定,菌株2614A723为Actinoallomurus的一个新种,命名为Actinoallomurus acanthiterra sp. nov.。