研究背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)作为世界上发病率最高、死亡率最高的恶性肿瘤性疾病,尽管目前诊断、治疗的手段不断发展,但是5年生存率仅19.8%。非小细胞肺癌的发病过程中涉及了多种分子机制及多种环境等的危险因素。通过研究其相关分子通路的作用机制,有助于明确发病机制及发病过程,并且能为寻找新的诊断及治疗靶点和治疗途径提供一定的理论依据。有研究提示EZH2通过催化靶基因甲基化沉默从而介导了多种信号通路的调控,此外,还参与非小细胞肺癌(NSCLC)的生长、转移、耐药等过程。并且在非小细胞肺癌患者中EZH2的高表达同预后差密切相关。在此之前我们对不同类型非小细胞肺癌细胞株中利用染色质免疫共沉淀-启动子芯片技术(CHIP-on-chip)检测发现EZH2蛋白均结合Cul4A基因启动子区域,提示了EZH2可能靶向调控了Cul4A基因。另外,研究表明作为E3泛素化连接酶的核心成员Cul4A可能通过泛素化调节了m TOR通路,并且有报道提示m TOR的激活可引起Gli的高表达。所以我们推测非小细胞肺癌中EZH2可能通过m TOR途径调节Hedgehog-Gli通路。目的:1.拟证实在非小细胞肺癌中EZH2基因参与了Hedgelog-Gli通路的激活;2.探索EZH2在非小细胞肺癌中的作用机制,为探寻非小细胞肺癌诊疗的潜在分子靶点提供依据方法:1.在EZH2低表达的H226、H441中利用质粒转染外源性EZH2,使EZH2上调后Real-time PCR检测EZH2、P21、N-Myc、BCL1和GLi1的m RNA表达变化;2.在EZH2低表达的H226、H441中利用质粒转染外源性EZH2并加用m TOR抑制剂雷帕霉素作用细胞后Real-time PCR检测P21、N-Myc、BCL1和Gli1的m RNA表达变化;3.在EZH2低表达的H226、H441中利用质粒转染外源性EZH2,使EZH2上调后利用Western blot检测P21、N-Myc、BCL1和GLi1的蛋白表达变化;4.在EZH2低表达的H226、H441中利用质粒转染外源性EZH2并加用m TOR抑制剂雷帕霉素作用细胞后利用Western blot检测P21、N-Myc、BCL1和Gli1的蛋白表达变化。结果:1.EZH2低表达细胞H226、H441中转染外源性EZH2基因48小时后,Real-time PCR和Weztern blot检测结果提示,高表达EZH2的H226及H441中P21表达量降低;N-Myc表达量无明显变化;而BCL1及Gli1表达量升高。2.EZH2低表达细胞H226、H441中转染外源性EZH2基因48小时后,使用m TOR抑制剂雷帕霉素处理细胞,可使P21表达量重新上调,N-Myc表达出现下调,BCL1表达出现下调,而Gli1表达未见无明显变化。结论:在非小细胞肺癌中EZH2可能参与Hedgehog信号通路的活化,利用m TOR抑制剂未能使Gli1表达改变,提示EZH2活化Hedgehog信号通路并非依赖m TOR通路。