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食用菌菌种保藏方法众多,其中液氮保藏是一种安全有效且能长期保藏菌种的方法。但是液氮保藏过程中的降温方式、保护剂及解冻方式等环节都影响到菌种保藏效果。为了更好地保存食用菌种质资源,需要系统研究菌种液氮保藏过程中的各环节,并对保藏后的菌种进行保藏效果的鉴定,以期为菌种液氮保藏方法提供一定的理论依据和技术支持。本实验选择皖平菇1号和新平400的原种为实验材料,设计降温方式、保护剂及解冻方式三因素三水平的正交试验,对高温型和低温型的两个平菇菌种的液氮保藏技术进行比较系统的研究,并鉴定菌种的液氮保藏效果,主要测定菌丝体生长指标、子实体形态学指标及产量、子实体粗蛋白以及可溶性糖含量、子实体酯酶同工酶谱和SRAP分子标记分析,通过以上指标鉴定其遗传稳定性,以期找到平菇菌种液氮保藏的适宜条件,也为其它菌种的液氮保藏提供一些有利的借鉴。主要结论如下:(1)液氮保藏对皖平菇1号和新平400菌丝体生长指标影响最小的处理均为不加保护剂直接将菌种放入液氮,3840℃水浴快速解冻的条件组合。保护剂和解冻方式是产生影响的两个主要因素,降温方式为次要因素;(2)液氮保藏对皖平菇1号子实体形态学指标、子实体产量产生影响最小的处理组合均为A1B1C3,保护剂为主要影响因素;对新平400以上各指标影响最小的处理均为A3B2C3,解冻方式为主要影响因素。(3)液氮保藏对皖平菇1号和新平400子实体可溶性蛋白和可溶性糖含量的影响不同。对皖平菇1号可溶性蛋白影响最小的处理为A1B2C1,保护剂为主要影响因素,对可溶性糖影响最小的处理为A1B1C3,解冻方式为主要影响因素;对新平400子实体可溶性蛋白影响最小的处理为A3B1C1,降温方式为主要影响因素,对可溶性糖影响最小的处理为A2B2C1,保护剂为主要影响因素。(4)液氮保藏对两个菌株遗传稳定性没有明显影响,子实体酯酶同工酶谱产生少量差异,试验所选两个处理组合(皖平菇1号为A1B1C3和A3B3C2,新平400为A2B3C3和A1B1C2)的子实体DNASRAP扩增产物经电泳分析,部分引物出现少量特异性条带,这可能是由于真菌本身变异性较大所致,也有可能是因为在液氮保藏的过程中,低温环境导致了某些抗性基因的变化,这还有待于进一步探讨。(5)液氮保藏后皖平菇1号酯酶同工酶谱平均每个处理出现2.9条不同的酶带,新平400平均每个处理出现4.8条不同酶带,SRAP分析皖平菇1号两个处理共出现10条差异条带,新平400共出现23条差异条带。皖平菇1号两个处理出现的特异性条带数在总条带中所占的比例分别为4%和1.8%,新平400两个处理分别为11.7%和10.7%。所以,液氮处理后,高温型菌株皖平菇1号遗传稳定性比低温型菌株新平400受影响小,而同一菌株的两个处理受影响情况相差不大。高温型平菇菌种对液氮低温环境的抵抗力更强。