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目的:UHRF1（Ubiquitin-like with PHD and RING Finger domains 1）是泛素样含PHD和环指域蛋白家族（UHRF）的主要成员之一,是调节肿瘤抑癌基因启动子区甲基化的重要表观遗传调节因子。UHRF1通过维持肿瘤抑制基因（tumor-suppressing gene,TSG）启动子区甲基化,抑制抑癌基因的表达,与肿瘤的发生、发展、治疗、预后等密切相关。目前尚无UHRF1基因沉默对人肺腺癌A549细胞侵袭和迁移的影响及机制的报道,本实验通过观察慢病毒介导的UHRF1基因沉默对人肺腺癌A549细胞侵袭和迁移能力的影响作用,并探讨其可能的调控机制,为非小细胞肺癌的治疗提供新的理论依据和方法。方法:将A549细胞接种于装有适量含10%胎牛血清的RPMI1640培养液的培养瓶中,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。取处于对数生长期生长情况良好的细胞用于后续实验。转染前1d调整细胞密度为5×104/mL,以100μL/孔接种于96孔板。实验分为3组[未进行转染的空白对照组（NC组）、转染空病毒载体LV-NC-GFP的阴性对照组（空载组）及转染LV-UHRF1-shRNA-GFP#（39-1）的UHRF1干扰组（沉默组）]。采用Transwell实验在倒置显微镜下计数各组细胞迁移至微孔膜下层的细胞数,记录穿膜细胞数（个/HP）;采用细胞划痕实验观察0h、24h划痕宽度,记录24 h划痕相对宽度;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组细胞中的UHRF1、上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关分子（E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin）mRNA和蛋白表达水平;甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）检测细胞中KISS1和PAX5基因启动子区甲基化程度。上述所有实验均重复3次,取平均值。结果:1、慢病毒LV-UHRF1-shRNA-GFP#（39-1）转染A549细胞后显著沉默UHRF1mRNA及蛋白表达水平,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）。2、细胞侵袭、迁移能力:UHRF1基因沉默后,沉默组穿膜细胞数明显少于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;UHRF1基因沉默后,24 h划痕相对宽度明显大于对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。3、KISS1、PAX5甲基化程度:UHRF1基因沉默后,沉默组KISS1、PAX5基因启动子区甲基化程度明显降低,与对照组相比差异有统计学意义（P均<0.01）。4、EMT相关分子的表达:UHRF1基因沉默后,沉默组细胞中N-Cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达减少,E-Cadherin mRNA和蛋白表达增加,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1、慢病毒介导的shRNA沉默UHRF1基因表达,可抑制A549细胞侵袭和迁移能力。2、沉默UHRF1基因可降低A549细胞中KISS1、PAX5基因启动子区甲基化程度,抑制上皮间质转化（EMT）过程。3、沉默UHRF1基因表达可抑制A549细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与降低KISS1和PAX5基因启动子区的甲基化程度,从而抑制上皮间质转化过程有关。