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本研究人工合成了肿瘤特异性启动子PEG-3p,将PEG-3p启动子置于人5型腺病毒复制必需基因E1a上游,并利用CMV启动子驱动特异性抑癌基因HN,构建了具有肿瘤特异性复制和肿瘤特异性杀伤功能的双特异性重组腺病毒,实现了对肿瘤细胞的双特异性的识别与攻击,在安全、有效的肿瘤基因治疗研究领域做出了有益尝试。本研究应用双特异性抗肿瘤重组腺病毒感染体外培养的LLC细胞,运用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)分析法检测双特异性抗肿瘤重组腺病毒对LLC肿瘤细胞的抑制作用。通过吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法和二脒基苯基吲哚(DAPI)染色法对双特异性抗肿瘤重组腺病毒感染的肿瘤细胞进行形态学观察;应用Annexin V染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;应用底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8的活性变化,探讨了重组腺病毒抑制LLC肿瘤细胞的作用方式。构建了C57BL/6小鼠荷瘤小鼠肺癌(LLC)肿瘤模型,旨在观察我们所构建的重组腺病毒在活体内的抑瘤作用。实验结果显示,Ad-HN、Ad-HP均可不同程度地抑制体内肿瘤的生长,荷瘤小鼠模型的生存率得到了提高,生存期也不同程度的延长。同时通过应用ELISA法检测了不同细胞因子含量的变化,结果表明Ad-HN、Ad-HP还可以刺激机体的免疫系统产生抗肿瘤的免疫反应。根据细胞因子量的不同,我们可以推测免疫反应倾向于Th1优势。