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猪圆环病毒（porcine circovirus,PCV）可分为猪圆环病毒1型（PCV 1）和猪圆环病毒2型（PCV 2）。其中PCV 2具有致病性,是导致断奶仔猪多系统衰竭综合征和其他圆环病毒相关疾病的主要病因。自1991年首次在加拿大发现该病毒以来,该病毒及其并发症已遍布全球,成为危害养猪业的主要疫病之一。该病毒可在宿主的免疫系统细胞中复制,故弱毒或灭活疫苗的研制有一定困难。现有疫苗存在制备成本高、效应时间短及生物安全性等问题,所以其推广和有效使用受到严重后果制约。因此,基于基因工程技术研发新型亚单位疫苗是目前疫苗研究的热点方向。分析PCV 2基因序列发现,其基因组呈现出2个主要的开放阅读框（ORFs）,其中ORF2编码的Cap蛋白是猪圆环病毒衣壳蛋白的主要构成单元,是PCV 2主要的免疫保护性抗原,能够诱导机体产生特异性的免疫反应应答,是研制新型基因工程亚单位疫苗的理想靶基因。为获得能够携带目的基因的表达载体,本实验首先用PCR扩增PCV 2 Cap基因,再在T4 DNA ligase酶作用下连接至果蝇S2细胞表达载体pMT/Bip/V5-His A中,构建出重组pMT-Cap质粒。鉴定正确后与pCoHygro质粒共转染果蝇S2细胞,再以适当浓度的抗生素Hygromycin B加压筛选出含有目的基因并能够稳定遗传的细胞株。培养筛选的稳定细胞株,使用CuSO4在500μM浓度下诱导稳定细胞株起始翻译外源基因合成PCV 2 Cap蛋白,在pMT/Bip/V5-His A载体中Bip分泌信号肽的介导下,合成的Cap蛋白可分泌至培养基上清液中。分别设置不同的诱导时间（0 h、24h、48 h、72 h、96 h）诱导表达,并收集上清液作Western Blot检测。结果发现PCV2 Cap蛋白能够在果蝇S2细胞中正确表达,且在诱导72 h左右时Cap蛋白的表达水平最高。以该时间点诱导并收集足量在培养的稳定细胞株中表达的Cap蛋白,首先使用Western Blot方法检测了PCV 2 Cap蛋白的表达;接着用间接免疫荧光法检测了外源基因表达,在稳定的细胞株中有明显的红色荧光,表明PCV 2 Cap基因在果蝇S2昆虫细胞中成功表达;经透射电镜检测发现,PCV 2 Cap蛋白在果蝇S2细胞内能组装成猪圆环病毒2型病毒样颗粒（PCV 2 VLPs）,形成直径约为17 nm大小的规则圆形白色颗粒物质;最后以间接ELISA的方法检测了经蔗糖密度离心纯化后的蛋白抗原性,发现在超速离心管底层的蛋白抗原性较高,表明纯化效果良好。为了检测PCV 2 VLPs能否使小鼠产生免疫反应,实验将PCV 2 VLPs与GEL佐剂按15%的比例混匀后免疫实验小鼠,在免疫后第7 d、14 d、21 d、28 d、35 d时间眼眶采血,分离血清并用ELESA方法检测血清中特异性IgG抗体产生情况,发现果蝇S2细胞表达的PCV 2 Cap蛋白组装的VLPs能引起小鼠体液免疫并产生特异性抗体,且抗体水平在免疫后28 d时达到最高水平,证明该蛋白具有良好的抗原性,有进一步研发疫苗的潜质。本实验为开发PCV 2基因工程亚单位疫苗提供了一定的实验基础。