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附睾是精子成熟和储存的重要场所，精子在穿越附睾的过程中与不断变化的附睾微环境相互作用而逐渐成熟，获得运动和受精的能力，而附睾特殊的微环境变化归因于附睾基因的表达和调控的结果。本课题研究的mLCN6(mouse lipocalin6)是我们实验室根据大鼠LCN6基因首次从小鼠附睾中克隆得到的同源基因，在附睾头部特异表达，经序列和二级结构预测表明该基因属于lipocalin家族。本课题将深入研究mLCN6的基因特性，我们以往的研究表明，mLCN6通过变异剪切产生两个主要转录本，分别命名为mLCN6α和mLCN6β；原位杂交结果表明该基因在附睾起始段及近端头部特异表达；发育性变化表明该基因在出生后3周开始出现，并且在性活跃期和成年期间保持较高水平，老年以后随时间逐步下降，说明该基因可能受雄激素调控并且与精子的成熟和生殖水平密切相关。本论文的第一部分研究工作旨在探讨小鼠附睾上皮细胞中的mLCN6 mRNA表达的调控。我们用Northern Blot的方法对阉割后及雄激素注射后小鼠附睾中mLCN6mRNA的表达进行分析，结果表明：mLCN6 mRNA在小鼠附睾中的表达与血清中睾酮的浓度呈正相关。阉割后mLCN6 mRNA表达迅速下降，皮下注射睾酮后，mLCN6mRNA的表达先升后降，但并没有恢复到阉割前水平。输出小管结扎以后阻止了睾丸中的流体进入附睾但并不影响雄激素的分泌，Northern Blot结果发现结扎侧附睾mLCN6 mRNA表达水平显著低于对照侧，通过时间的变化还发现结扎后第一天结扎侧附睾mLCN6 mRNA表达水平就已经显著下调，并随时间推移始终保持较低水平。RT-PCR结果表明mLCN6α和mLCN6β受雄激素和睾丸因子影响是相同的。以上实验结果提示mLCN6基因在附睾中受雄激素和睾丸因子共同调控。为了从蛋白质水平深入研究mLCN6α和mLCN6β在精子成熟中的作用以及这两个isoform在蛋白水平上的表达差异，需要制备特异性抗体。因此，我们在大肠杆菌中分别表达了mLCN6α和mLCN6β共有的一条含118个氨基酸的肽段和将mLCN6α特有的58个氨基酸双拷贝串联起来的肽段，分别命名为mLCN6C和mLCN6D；通过SDS-PAGE凝胶蛋白电泳及电洗脱纯化这两个目的蛋白，并将纯化的目的蛋白分别免疫新西兰大白兔，得到了两种抗血清；经ELISA和Western印迹检测证明得到了两种效价比较高、特异性比较好，并且能够分别特异性结合mLCN6C和mLcN6D融合蛋白的抗血清，为进一步探索mLCN6的功能提供了重要的基础。